【摘要】： 骨橋蛋白(osteopontin, OPN),是一種在多種組織和細胞廣泛表達的磷酸化糖蛋白。OPN具有多種生物學功能,特別是OPN與自身免疫,腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。 目的：制備人骨橋蛋白(osteopontin, OPN)特異性單克隆抗體(mAb),并鑒定其生物學功能. 方法：利用RT-PCR技術(shù)克隆人骨橋蛋白(hOPN)基因.構(gòu)建OPN原核表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化BL21菌株,IPTG誘導表達rhOPN.利用純化的rhOPN蛋白為免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞NS1融合,通過有限稀釋法進行克隆和間接ELISA篩選,獲得抗人OPN蛋白mAb雜交瘤細胞株,以ELISA、Western blot對抗體特異性進行鑒定.通過競爭抑制試驗對單克隆抗體識別抗原位點進行分析.通過細胞侵襲試驗檢測抗人OPN單克隆抗體的功能. 結(jié)果：獲得2株抗人OPN單克隆抗體,分別命名為8F1和285,亞型測定皆為IgG1,且這2株抗體皆能很好地抑制細胞遷移. 結(jié)論：本研究成功獲得了2株抗人骨橋蛋白的特異性單克隆抗體,且這2株抗體皆能很好地抑制細胞遷移。為進一步研究OPN蛋白在自身免疫病和腫瘤中的功能提供了重要的工具.
[Abstract]:Osteopontin (osteopontin, OPN), is a phospho-glycoprotein widely expressed in many tissues and cells. OPN has many biological functions, especially OPN is closely related to autoimmune, tumor growth and metastasis. Objective: to prepare human osteopontin (osteopontin, OPN) specific monoclonal antibody (mAb), and identify its biological function. Methods: human osteopontin (hOPN) gene was cloned by RT-PCR. Construction of prokaryotic expression plasmid of OPN, transformation of BL21 strain and expression of rhOPN. induced by IPTG The purified rhOPN protein was used as immunogen to immunize BABL/c mice, and the spleen cells were fused with mouse myeloma cells NS1. The hybridoma cell lines against human OPN protein mAb were obtained by cloning and indirect ELISA screening by limited dilution method. The hybridoma cell lines against human OPN protein mAb were obtained with ELISA,. The specificity of antibody was identified by Western blot. Monoclonal antibody recognition antigen sites were analyzed by competitive inhibition test. The function of anti-human OPN monoclonal antibody was detected by cell invasion test. Results: two monoclonal antibodies against human OPN were obtained, named 8F1 and 285 respectively. The subtypes were determined as IgG1, and both of them could inhibit cell migration well. Conclusion: two specific monoclonal antibodies against human osteopontin have been successfully obtained in this study, and both of these monoclonal antibodies can inhibit the migration of human osteopontin cells. It provides an important tool for further study of the function of OPN protein in autoimmune diseases and tumors.
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：2451358