【摘要】： 目的：1.探討臍血單個核細胞(CB-MNCs)的體外分離、培養(yǎng)、擴增的規(guī)律和特點,初步探討臍血單個核細胞(CB-MNCs)在體外向神經(jīng)細胞分化的條件。2.采用全反式維甲酸(All-Trans-Retinoic Acid,RA)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)作為誘導劑,對臍血單個核細胞(CB-MNCs)進行體外誘導實驗。探討RA和bFGF體外誘導臍血單個核細胞分化為神經(jīng)細胞的機制,為脊髓損傷的細胞移植治療提供實驗基礎。 方法：1.收集臍血：收集妊娠足月正常分娩的新生兒臍帶血,按衛(wèi)生部頒布的《獻血體檢標準》檢驗合格,于第3產(chǎn)程自臍靜脈消毒后全封閉采集臍血,CPD21抗凝,平均采量80-130ml。2臍血分離：新鮮臍血在24小時內分離。新鮮血液與PBS按1：l比例混勻并制成細胞懸液,疊加到淋巴細胞分離液上,2000 r/min離心20 min,然后取出白膜層,1000 r/min離心10 min,棄上清,然后調整細胞濃度為1×106／ml。3.分組：將上述CB-MNCs以3×106個細胞接種于6孔培養(yǎng)板,每孔終體積3ml(含20%FBS的H.DMEM。雙抗生素青、鏈霉素各100U／ml);按誘導體系中誘導因素的不同組合分4組,A組：對照組,不加任何因子。B組：加全反式維甲酸。C組：加堿性成纖維生長因子。D組：加堿性成纖維生長因子和全反式維甲酸。每日在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化,每3天更換培養(yǎng)基,棄未貼壁細胞；2周后觀察結果。4.細胞免疫熒光鑒定：采用細胞免疫熒光方法,對以上四組細胞誘導2周后檢測神經(jīng)元標志物Tuj-1和星形膠質細胞標志物GFAP的表達情況,熒光顯微鏡下觀察并拍照記錄。熒光顯微鏡下在各組細胞隨機取100個細胞,計數(shù)Tuj-1及GFAP反應陽性細胞個數(shù)之和,統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)均以x±s表示,并用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析。 結果：1,倒置顯微鏡下形態(tài)觀察結果：剛分離的CB-MNCs呈小、圓形,1d后,少量細胞貼壁生長,未見明顯形態(tài)變化；6d時B、C、D組均可見一些細胞伸出胞突,有的呈梭狀,有的伸出細絲狀的突起；10d時,D組細胞可見一些細胞胞體變大、胞突伸長,有的細胞雙極,有的多極；14d后,A組細胞未見明顯變化,而B、C、D組可見一些胞體較大、有數(shù)個粗長突起的細胞生長,相鄰細胞突起連成網(wǎng)狀,類似神經(jīng)元。2,細胞免疫熒光結果：CB-MNCs誘導為神經(jīng)細胞,經(jīng)統(tǒng)計學分析,(1)誘導后D組分化率最高,與其它組有顯著差異(P0.05)；(2)誘導后B、C、D組與A組分化率有顯著差異(P0.05)；(3)B和C組分化率無顯著差異(P0.05)。 結論：1.全反式維甲酸與堿性成纖維生長因子均能誘導臍血單個核細胞分化成神經(jīng)細胞。2.堿性成纖維生長因子聯(lián)合全反式維甲酸能協(xié)同誘導臍血單個核細胞分化成神經(jīng)細胞,提高臍血單個核細胞的神經(jīng)細胞轉化率。
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【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 馬希峰;楊波;杜英;阮麗榮;徐虹;胡祥;胡平生;王云龍;;人CD34~+臍血干細胞移植治療大鼠脊髓損傷[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2006年02期

2 楊芬;楊乃龍;林鵬;;骨髓間充質干細胞體外誘導神經(jīng)干細胞分化的觀察[J];山東醫(yī)藥;2008年03期

3 侯玲玲,鄭敏,王冬梅,袁紅豐,李海民,陳琳,白慈賢,張涌,裴雪濤;人骨髓間充質干細胞在成年大鼠腦內的遷移及分化[J];生理學報;2003年02期

4 KAM-SZE TSANG;;Induction of Functional Recovery by Co-transplantation of Neural Stem Cells and Schwann Cells in a Rat Spinal Cord Contusion Injury Model[J];Biomedical and Environmental Sciences;2007年03期

5 周向陽;鄧永文;方芳;王飛;陳若琨;宋濤;方加勝;;自體脂肪干細胞移植腦凍傷大鼠腦內的作用[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年16期

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本文編號：2448739