發(fā)布時(shí)間：2019-03-28 09:16

【摘要】： 目的：1.探討臍血單個(gè)核細(xì)胞(CB-MNCs)的體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增的規(guī)律和特點(diǎn),初步探討臍血單個(gè)核細(xì)胞(CB-MNCs)在體外向神經(jīng)細(xì)胞分化的條件。2.采用全反式維甲酸(All-Trans-Retinoic Acid,RA)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)作為誘導(dǎo)劑,對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞(CB-MNCs)進(jìn)行體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。探討RA和bFGF體外誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)制,為脊髓損傷的細(xì)胞移植治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：1.收集臍血：收集妊娠足月正常分娩的新生兒臍帶血,按衛(wèi)生部頒布的《獻(xiàn)血體檢標(biāo)準(zhǔn)》檢驗(yàn)合格,于第3產(chǎn)程自臍靜脈消毒后全封閉采集臍血,CPD21抗凝,平均采量80-130ml。2臍血分離：新鮮臍血在24小時(shí)內(nèi)分離。新鮮血液與PBS按1：l比例混勻并制成細(xì)胞懸液,疊加到淋巴細(xì)胞分離液上,2000 r/min離心20 min,然后取出白膜層,1000 r/min離心10 min,棄上清,然后調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106／ml。3.分組：將上述CB-MNCs以3×106個(gè)細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板,每孔終體積3ml(含20%FBS的H.DMEM。雙抗生素青、鏈霉素各100U／ml);按誘導(dǎo)體系中誘導(dǎo)因素的不同組合分4組,A組：對(duì)照組,不加任何因子。B組：加全反式維甲酸。C組：加堿性成纖維生長(zhǎng)因子。D組：加堿性成纖維生長(zhǎng)因子和全反式維甲酸。每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,每3天更換培養(yǎng)基,棄未貼壁細(xì)胞；2周后觀察結(jié)果。4.細(xì)胞免疫熒光鑒定：采用細(xì)胞免疫熒光方法,對(duì)以上四組細(xì)胞誘導(dǎo)2周后檢測(cè)神經(jīng)元標(biāo)志物Tuj-1和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的表達(dá)情況,熒光顯微鏡下觀察并拍照記錄。熒光顯微鏡下在各組細(xì)胞隨機(jī)取100個(gè)細(xì)胞,計(jì)數(shù)Tuj-1及GFAP反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)之和,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)均以x±s表示,并用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。 結(jié)果：1,倒置顯微鏡下形態(tài)觀察結(jié)果：剛分離的CB-MNCs呈小、圓形,1d后,少量細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),未見明顯形態(tài)變化；6d時(shí)B、C、D組均可見一些細(xì)胞伸出胞突,有的呈梭狀,有的伸出細(xì)絲狀的突起；10d時(shí),D組細(xì)胞可見一些細(xì)胞胞體變大、胞突伸長(zhǎng),有的細(xì)胞雙極,有的多極；14d后,A組細(xì)胞未見明顯變化,而B、C、D組可見一些胞體較大、有數(shù)個(gè)粗長(zhǎng)突起的細(xì)胞生長(zhǎng),相鄰細(xì)胞突起連成網(wǎng)狀,類似神經(jīng)元。2,細(xì)胞免疫熒光結(jié)果：CB-MNCs誘導(dǎo)為神經(jīng)細(xì)胞,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,(1)誘導(dǎo)后D組分化率最高,與其它組有顯著差異(P0.05)；(2)誘導(dǎo)后B、C、D組與A組分化率有顯著差異(P0.05)；(3)B和C組分化率無(wú)顯著差異(P0.05)。 結(jié)論：1.全反式維甲酸與堿性成纖維生長(zhǎng)因子均能誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞。2.堿性成纖維生長(zhǎng)因子聯(lián)合全反式維甲酸能協(xié)同誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞,提高臍血單個(gè)核細(xì)胞的神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 馬希峰;楊波;杜英;阮麗榮;徐虹;胡祥;胡平生;王云龍;;人CD34~+臍血干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

2 楊芬;楊乃龍;林鵬;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化的觀察[J];山東醫(yī)藥;2008年03期

3 侯玲玲,鄭敏,王冬梅,袁紅豐,李海民,陳琳,白慈賢,張涌,裴雪濤;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在成年大鼠腦內(nèi)的遷移及分化[J];生理學(xué)報(bào);2003年02期

4 KAM-SZE TSANG;;Induction of Functional Recovery by Co-transplantation of Neural Stem Cells and Schwann Cells in a Rat Spinal Cord Contusion Injury Model[J];Biomedical and Environmental Sciences;2007年03期

5 周向陽(yáng);鄧永文;方芳;王飛;陳若琨;宋濤;方加勝;;自體脂肪干細(xì)胞移植腦凍傷大鼠腦內(nèi)的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年16期

，

本文編號(hào)：2448739