【摘要】： 目的分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為研究對象,建立囊管化細(xì)胞的回收方法和囊管化細(xì)胞活性測定方法,研究聚己內(nèi)酯半透膜囊管化對細(xì)胞活性的影響,探討半透膜影響細(xì)胞活性的機(jī)制,為聚己內(nèi)酯半透膜免疫隔離移植技術(shù)的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供依據(jù)。 方法分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)胞懸液置聚己內(nèi)酯半透膜管內(nèi),半透膜管兩端70℃熱夾閉封裝,細(xì)胞貼壁后0.25%胰酶消化回收細(xì)胞,測定不同消化時間對細(xì)胞活性和回收率的影響。以添加10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液平皿法細(xì)胞培養(yǎng)為對照組,設(shè)置3個實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行聚己內(nèi)酯囊管化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)活性研究。實(shí)驗(yàn)組1:細(xì)胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝,完全培養(yǎng)液培養(yǎng),小分子營養(yǎng)物質(zhì)能夠通過滲透有效補(bǔ)充;實(shí)驗(yàn)組2:細(xì)胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝,不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng),血清小分子活性物質(zhì)不能有效補(bǔ)充;實(shí)驗(yàn)組3:細(xì)胞以基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮后封裝,完全培養(yǎng)液培養(yǎng),小分子營養(yǎng)物質(zhì)能夠通過滲透補(bǔ)充,但細(xì)胞缺乏血清大分子的營養(yǎng)。囊管內(nèi)細(xì)胞胰酶消化回收,以細(xì)胞計數(shù)、MTT法、CCK-8法測定細(xì)胞的活性,并進(jìn)行生長曲線分析。以完全培養(yǎng)液平皿法細(xì)胞培養(yǎng)為對照組,設(shè)2個實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行聚己內(nèi)酯囊管化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植細(xì)胞活性研究。兩個實(shí)驗(yàn)組分別以完全培養(yǎng)液和基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞后封裝移植,囊管內(nèi)細(xì)胞回收后以細(xì)胞計數(shù)、MTT法、CCK-8法測定細(xì)胞的活性,共8天,進(jìn)行生長曲線分析。 結(jié)果分離培養(yǎng)得到典型的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞活性良好。70℃熱封裝及采用0.25%胰酶消化3分鐘對細(xì)胞無明顯損傷,活細(xì)胞超過95%,細(xì)胞回收率不低于97%的。完全培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞封裝,以完全培養(yǎng)液培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成活良好,細(xì)胞增殖率達(dá)到150%,低于對照組的210%。完全培養(yǎng)液懸浮封裝,基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性迅速下降,一周之內(nèi)全部死亡;基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮封裝,以完全培養(yǎng)液培養(yǎng),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性下降,2-3天后逐漸上升,細(xì)胞增殖率低于10%,3個實(shí)驗(yàn)組與對照組均具有顯著性差異。異體移植實(shí)驗(yàn)中,完全培養(yǎng)液懸浮和封裝后移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖率約為140%;較對照組200%為低,基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞封裝后細(xì)胞活性下降,其后逐漸上升,但增殖率低于10%,2個實(shí)驗(yàn)組與對照組均具有顯著性差異。 結(jié)論建立了囊管化細(xì)胞的回收方法和以細(xì)胞回收為基礎(chǔ)的囊管化細(xì)胞活性測定方法,發(fā)現(xiàn)囊管化封裝對細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞移植均有一定的的抑制作用。血清中小分子活性物質(zhì)對細(xì)胞具有重要的意義,是細(xì)胞存活和生長的關(guān)鍵。血清中大分子對細(xì)胞活性具有一定的作用,缺乏血清大分子細(xì)胞的增殖明顯減弱,囊內(nèi)血清大分子的耗竭可能是半透膜包裹細(xì)胞難以長期存活的原因之一。由于低分子物質(zhì)的通透性是細(xì)胞活性的關(guān)鍵,半透膜免疫隔離技術(shù)能夠保證細(xì)胞一定時間內(nèi)的活性,可以作為解決異體移植排斥反應(yīng)的一種手段。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2442112