【摘要】： 目的 皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜的過程,包括止血、炎癥、肉芽組織形成、上皮覆蓋和最終的組織重建。Ⅰ型大麻素受體(cannabinoid receptor type 1, CB1R)為內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)(endocannabinoid system, ECs)的一個(gè)主要的成員之一,它是G蛋白偶連受體(G protein-coupled receptor, GPCR),它主要表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng),同時(shí)也部分表達(dá)于外周器官,如肝臟、胃腸等。本研究用兩種識(shí)別CB1R不同區(qū)域的多克隆抗體檢測(cè)小鼠皮膚損傷愈合過程中CB1R的表達(dá)及變化情況,探討CB1R在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。 實(shí)驗(yàn)材料與方法 健康成年清潔級(jí)昆明系小鼠50只,雄性,體質(zhì)量35～40g,隨機(jī)分為10組。其中皮膚切創(chuàng)分為9個(gè)時(shí)間段組,另一組為正常對(duì)照組,每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術(shù)消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達(dá)筋膜。每只小鼠分籠飼養(yǎng),給予消毒飼料及自來水以預(yù)防感染。分別于傷后Oh,6h,12h, Id,3d,5d,7d, 10d和14d將小鼠脫頸椎處死,取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。正常對(duì)照組小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),觀察至14d,脫頸椎處死,取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blotting檢測(cè)應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot技術(shù)檢測(cè)50例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時(shí)間段CB1R變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對(duì)照,顯微鏡x400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。應(yīng)用Fluochem V2.0軟件檢測(cè)各時(shí)間段的平均灰度值,測(cè)得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 正常小鼠皮膚的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌層中表達(dá)CB1R。皮膚切創(chuàng)傷后6h,多核粒細(xì)胞不表達(dá)CBIR。傷后12-24h,部分單個(gè)核細(xì)胞CB1R呈陽性。傷后l-3d, CB1R陽性細(xì)胞主要以單個(gè)核細(xì)胞和梭形成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞為主。傷后5-14d, CB1R表達(dá)主要在梭形成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞中。傷后Oh-ld, CB1R陽性細(xì)胞率逐漸增加。傷后3-5d呈高表達(dá)狀態(tài),5d達(dá)到高峰。傷后7d-14d, CB1R陽性細(xì)胞率逐漸下降。各組與相鄰上組的細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示正常皮膚內(nèi)有CB1R陽性條帶。皮膚切創(chuàng)后各時(shí)間段組CB1R表達(dá)強(qiáng)度有一定規(guī)律。傷后Oh-3d,陽性條帶逐漸增強(qiáng)；傷后5d, CB1R達(dá)到高峰。傷后7d-14d,陽性條帶依然較強(qiáng),但呈下降趨勢(shì)。除0h與正常對(duì)照組間平均灰度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P0.05),其余各組間平均灰度值差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.正常小鼠皮膚的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌層中表達(dá)CB1R。 2.小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中單個(gè)核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞表達(dá)CB1R,提示CB1R可能參與炎癥反應(yīng)和皮膚損傷后的愈合。 3.小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中CB1R表達(dá)的規(guī)律性變化可能用于皮膚切創(chuàng)損傷時(shí)間的推斷。
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【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張建軍;官大威;楊大利;;小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中磷酸化 p38MAPK 表達(dá)及其與時(shí)間的相關(guān)性[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

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本文編號(hào)：2436522