【摘要】： 目的:觀察A型肉毒毒素(botulinum toxin type A,BTX-A)對離體大鼠腸系膜上動脈血管平滑肌張力的作用和對內源性降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的影響。旨在揭示BTX-A對非膽堿能神經元遞質釋放的作用和機理。 方法:選取健康SD大鼠,體重350～500 g,雌雄不拘。實驗時股動脈放血致死,迅速取出腸系膜上動脈,剝去周圍的結締組織后制成2.0～3.0 mm長的血管環(huán),將兩根直徑0.2 mm的不銹鋼絲制成三角環(huán)狀,小心穿入血管環(huán),隨后置于盛有2 ml Krebs液(37℃恒溫,并持續(xù)通入95%O_2和5%CO_2的混和氣體)的浴槽中,一端固定,另一端固定在張力傳感器上。給予血管環(huán)1 g前負荷,孵育平衡約60 min,待肌條張力保持穩(wěn)定后(此張力為血管環(huán)靜息張力),加入腎上腺素α_1受體激動劑methoxamine(1μM)檢驗血管環(huán)的反應性,收縮良好的血管環(huán)用于實驗。用Krebs液洗脫血管環(huán),使其張力恢復靜息張力并穩(wěn)定15 min后,加藥觀察血管環(huán)張力變化。每次加藥都在前一藥物作用完全達到平衡后開始,平均加藥間隔約15 min。實驗隨機分三組,第一組:Krebs液為前期實驗環(huán)境,設對照組(n=8)和BTX-A組。BTX-A組按劑量分為10 U/ml(n=8)、20 U/ml(n=8)、40 U/ml(n=8)劑量組,觀察BTX-A對血管環(huán)靜息張力的影響。第二組:KCl(100 mM)為前期實驗環(huán)境,設對照組(n=8)和20 U/ml BTX-A組(n=8),觀察KCl引發(fā)血管張力升高后,BTX-A對收縮張力的影響。第三組:BTX-A組加10 U/ml(n=5),對照組不加(n=5),兩組血管均加入腎上腺素能神經阻滯劑guanethidine(5μM),孵育60min后加入KCl(100 mM)引發(fā)血管張力升高為前期實驗環(huán)境,張力平衡后BTX-A組和對照組血管均加入CGRP(0.5μM),后續(xù)加入CGRP受體拮抗劑CGRP(8-37)(1μM)或KCl(100 mM)引發(fā)血管張力升高并平衡后直接加入CGRP(8-37)(1μM),觀察BTX-A對內源性CGRP釋放的影響。 結果:①10 U/ml(n=8)、20 U/ml(n=8)、40 U/ml(n=8)BTX-A均使血管環(huán)張力降低,降低幅度分別為3.70±0.93%、11.58±1.67%、15.33±1.36%,呈劑量依賴性;對照組(n=8)加入等溶劑劑量的Krebs液,張力無變化;兩組血管環(huán)隨后加入腎上腺素受體拮抗劑-phentolamine(2μM),張力均降低,BTX-A各劑量組降低幅度分別為:23.04±3.82%、20.96±3.04%、18.23±2.44%,對照組為33.10±5.35%,BTX-A組與對照組及BTX-A各劑量組之間張力降低幅度差異均有統(tǒng)計學意義(均P＜0.01)。②100 mM KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高,加入20 U/ml BTX-A(n=8)可抑制KCl引發(fā)血管環(huán)張力增高,降低幅度為10.15±0.60%,對照組(n=8)加入等溶劑劑量的Krebs液,張力無變化,兩組血管環(huán)隨后加入phentolamine(2μM),張力均降低,降低幅度BTX-A組為26.54±8.92%,對照組為32.40±4.69%,兩組張力降低幅度差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。③KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高后,加入CGRP引起血管張力降低(均P＜0.01),減低幅度BTX-A組與對照組分別為0.2560±0.0114 g、0.2620±0.0356 g,兩組血管張力降低幅度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),隨后加入CGRP(8-37),張力均升高(均P＜0.01),升高幅度BTX-A組與對照組分別為0.2040±0.0439 g、0.2600±0.0316 g,兩組血管張力升高幅度差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高后,直接加入CGRP(8-37),對照組血管張力升高(P＜0.01),升高幅度為0.0640±0.0241g,BTX-A組張力變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論:①BTX-A對離體血管平滑肌有舒張作用,且呈劑量依賴性。后續(xù)加入腎上腺素受體拮抗劑-phentolamine,血管平滑肌進一步舒張,且隨著BTX-A劑量增大引起血管舒張幅度的增大,酚妥拉明使血管舒張幅度減小,提示BTX-A可能作用于腎上腺素能神經末梢,抑制去甲腎上腺素的釋放,從而引起血管平滑肌舒張;②KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高,BTX-A可抑制KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高,同樣說明BTX-A對血管平滑肌有舒張作用;③KCl激發(fā)血管環(huán)張力增高,外源性CGRP引起血管張力降低;BTX-A沒有影響外源性CGRP引起的血管張力降低,但影響了CGRP(8-37)對外源性CGRP誘導的血管舒張拮抗作用;BTX-A影響了CGRP(8-37)誘導的直接的血管收縮作用,提示BTX-A可能影響了內源性CGRP的釋放。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R363

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本文編號：2423635