【摘要】：目的建立甲型H1N1流感疫苗神經(jīng)氨酸酶含量測定參考品。方法對甲型H1N1流感疫苗原液進行還原電泳后,采用免疫印跡,糖蛋白染色,方法初步確定甲流H1N1疫苗原液中神經(jīng)氨酸酶SDS-PAGE條帶位置,切取條帶后通過edman N端測序法進行確認。采用Lowry法進行總蛋白定量,SDS-PAGE密度掃描的方法確定神經(jīng)氨酸酶比例,計算出疫苗原液中神經(jīng)氨酸酶含量。結(jié)果確定甲流疫苗原液中神經(jīng)氨酸酶在SDS-PAGE中相對分子質(zhì)量約71 000,對多批次疫苗原液進行測定后,選取神經(jīng)氨酸酶含量較高的批次進行測定,總蛋白質(zhì)量濃度為1046.00μg/m L,神經(jīng)氨酸酶質(zhì)量分數(shù)11.78%。二者相乘得出該批次疫苗原液神經(jīng)氨酸酶含量為123.22μg/m L。結(jié)論研究成功建立了甲型H1N1流感疫苗神經(jīng)氨酸酶含量測定參考品,其他毒株生產(chǎn)的流感疫苗也可以參考該方法建立NA含量測定參考品。
[Abstract]:Objective to establish a reference for the determination of neuraminidase in influenza A H1N1 vaccine. Methods after electrophoretic reduction of influenza A H1N1 vaccine, the neuraminidase SDS-PAGE bands in the H1N1 vaccine solution were preliminarily determined by immunoblotting and glycoprotein staining. The bands were sequenced and confirmed by edman N-terminal sequencing. The Lowry method was used to quantify the total protein and the SDS-PAGE density scanning method was used to determine the proportion of neuraminidase, and the content of neuraminidase in the vaccine solution was calculated. The results showed that the relative molecular weight of neuraminidase in SDS-PAGE was about 71,000. After the determination of the original solution of multiple batches of vaccine, the batches with higher content of neuraminidase were selected to determine the content of neuraminidase. The total protein concentration was 1046.00 渭 g / mL and the neuraminidase mass fraction was 11.78 渭 g / mL. The results showed that the neuraminidase content of the original solution of the vaccine was 123.22 渭 g / mL. Conclusion the reference material for the determination of neuraminidase in influenza A H1N1 vaccine was successfully established, and the reference material for the determination of NA content in influenza vaccine produced by other strains was also established.
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院 衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標準化重點實驗室;
【基金】：科技部國際合作專項(2013DFA31680)
【分類號】：R392

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本文編號：2415894