【摘要】： 自從1957年英國科學家Isaacs和Lindenmann發(fā)現(xiàn)干擾素(Interferon,IFN)以來,干擾素的分子結(jié)構(gòu)、基因結(jié)構(gòu)和分子生物學特性一直被人們所關(guān)注。干擾素是一種低分子量的可溶性糖蛋白,具有抗病毒和抗腫瘤的作用。干擾素分為Ⅰ型干擾素和Ⅱ型干擾素,前者包括IFN-α和IFN-β等,IFN-α具有很強的抗病毒能力。IFN-α主要由白細胞、Namalwa細胞、KG-1細胞、B淋巴細胞、慢性髓性白血病細胞、雞新城疫病毒(NDV)或水泡性口炎病毒(VSV)等誘導(dǎo)后的成纖維細胞產(chǎn)生。 用本實驗室已構(gòu)建的含鵝α干擾素基因的真核表達載體pcDNA3.1-IFN-α作為免疫原,免疫Balb/C鼠,以原核表達的重組GoIFN-α作為檢測抗原,檢測抗鵝α干擾素的單克隆抗體。經(jīng)過細胞融合,以間接ELISA方法和有限稀釋法進行篩選,經(jīng)3~5次亞克隆,獲得2株能穩(wěn)定分泌抗鵝α干擾素單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為2H6和4C8。 經(jīng)鑒定,2株雜交瘤細胞染色體數(shù)目分別為103和89條;單抗亞類均為IgM,輕鏈為κ鏈;雜交瘤細胞株連續(xù)傳20代以上及凍存后復(fù)蘇,細胞生長良好,效價穩(wěn)定;腹水效價均達到10-4以上;Western blot表明,McAb 2H6及4C8與重組鵝IFN-α均能發(fā)生特異性反應(yīng);競爭ELISA檢測結(jié)果顯示,McAb 4C8能與天然干擾素發(fā)生競爭抑制作用,為進一步進行干擾素的檢測奠定了基礎(chǔ)。由于2株單抗與天然及重組干擾素發(fā)生的特異性反應(yīng)有所區(qū)別,估計2株細胞抗體可能分別針對不同的抗原表位;單抗中和活性檢測結(jié)果顯示,McAb 4C8能夠中和天然干擾素的抗病毒作用。 總之,McAb 2H6及4C8的制備為進一步研究和檢測鵝IFN-α提供了有利的前提條件,并為鵝α干擾素在免疫機制研究、免疫功能檢測、純化鵝IFN-α等領(lǐng)域提供了廣泛的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Since the discovery of interferon (Interferon,IFN) by British scientists Isaacs and Lindenmann in 1957, the molecular structure, gene structure and molecular biological characteristics of interferon have been concerned. Interferon is a low molecular weight soluble glycoprotein with anti-viral and anti-tumor effects. Interferon is divided into type 鈪，

本文編號：2406051