【摘要】：缺氧再復氧(anoxia-reoxygenation, A/R)是指細胞在缺乏氧供應一段時間之后恢復供氧的過程,在恢復氧供應初期的短暫時間內(nèi),經(jīng)歷缺氧損傷的細胞不僅沒有減輕損傷,反而加重損傷,這種現(xiàn)象稱為缺氧再復氧損傷。臨床上多種缺血性心、腦血管疾病都伴有相應器官和組織的缺血再灌注損傷,缺血再灌注損傷也是多種缺血性心、腦血管疾病共有的病理生理學基礎。缺血再灌注是對于有血液供應的組織和/或器官而言,而對于無血液供應的細胞來說則是缺氧再復氧。缺氧再復氧發(fā)生后最明顯的變化是產(chǎn)生大量的活性氧,引起脂質(zhì)過氧化,造成細胞損傷,嚴重者導致細胞整體被破壞。 缺氧再復氧或缺血再灌注除涉及脂質(zhì)過氧化外,凝血和炎癥等病理過程也參與了缺氧再復氧或缺血再灌注。TF作為外源性凝血系統(tǒng)的啟動者,是凝血系統(tǒng)中唯一的細胞膜蛋白。近年來的研究發(fā)現(xiàn),TF除參與凝血過程外,還作為信號轉(zhuǎn)導分子介導腫瘤、胚胎發(fā)育、血管新生、炎癥、動脈粥樣硬化形成等多種病理生理過程。由此可見,TF在缺氧再復氧(缺血再灌注)損傷的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起一定的作用。那么TF在缺氧再復氧(缺血再灌注)損傷過程中如何起作用?起什么作用?目前尚無相關(guān)報道。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細胞為研究對象,經(jīng)過體外的缺氧再復氧過程,觀察了TF在缺氧再復氧過程中的作用,并就其機制進行了初步探討。 [目的]研究組織因子在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)缺氧再復氧損傷中的作用,并探討其機制。 [方法]HUVECs隨機等分成正常對照組、缺氧再復氧組(A/R)、反義寡脫氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, aODN/TF)+缺氧再復氧組(aODN/TF+A/R組)、正義寡脫氧核苷酸(sense oligodeoxynucleotide, sODN/TF)+缺氧再復氧組(sODN/TF+A/R組)以及錯配寡脫氧核苷酸(mismatched oligodeoxynucleotide, mODN/TF)+缺氧再復氧組(mODN/TF+A/R組),3個寡脫氧核苷酸組的HUVECs分別轉(zhuǎn)染aODN/TF、sODN/TF和mODN/TF。4個缺氧再復氧組的HUVECs經(jīng)歷3小時的缺氧,繼以2小時的再復氧。收集各組HUVEC,用體外細胞核轉(zhuǎn)錄檢測TFmRNA。一期凝血法測定TF促凝活性(tissue factor procoagulant activity, TF:C),酶聯(lián)免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測TF抗原(tissue factor antigen, TF:Ag)的含量。并檢測HUVECs的活性、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malonaldehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase, GSH-PX)、一氧化氮(nitric oxide, NO)和內(nèi)皮素-1(endothelin-1, ET-1)的含量。 另將HUVECs隨機等分為正常對照組、缺氧再復氧組(A/R)和滅活FVIIa+缺氧再復氧組(FVIIai+A/R組)。FVIIai+A/R組在HUVECs培養(yǎng)基中加入1,5-丹酰-谷氨酰-甘氨酰-精氨酰氯甲酰酮(DEGRck)滅活的人凝血因子Ⅶa(終濃度200nM)。A/R組和FVIIai+A/R組HUVECs經(jīng)過缺氧再復氧后,流式細胞術(shù)檢測活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)、凝血酶激活受體-1(proteinase activated receptor-1, PAR-1)、凝血酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2, PAR-2)、磷酸化p38有絲分裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activated protein kinases, phospho-p38 MAP kinase)和磷酸化p42/44有絲分裂原活化蛋白激酶(phospho-p42/44 mitogen activated protein kinases, phospho-p42/44 MAP kinase)的相對含量。 [結(jié)果]缺氧再復氧之后,TF表達在mRNA及蛋白質(zhì)水平方面均有增加,細胞活力、SOD、GSH-PX和NO的含量均減少,而LDH, MDA及ET-1的表達增加(與正常對照組相比P0.05～0.001)。aODN/TF+ A/R組HUVEC中的TF表達被抑制,細胞活力、SOD、GSH-PX和NO下降的程度較A/R組減小,LDH、MDA及ET-1增加的程度較A/R組減小(與A/R組相比P0.05～0.01)。缺氧再復氧之后,流式細胞學檢測顯示,ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶均不同程度的激活(與正常對照組相比,P0.001), FVIIai能夠抑制缺氧再復氧過程中ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶的激活,并改善缺氧再復氧過程中TF:C、MDA、SOD、GSH-PX、細胞活力和LDH的變化(與A/R組相比,P0.05～0.001)。 [結(jié)論]在缺氧再復氧損傷過程中,TF不僅介導了凝血過程,而且通過激活PAR-1、PAR-2、p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶誘發(fā)了炎癥反應,從而加重了細胞損傷。因而TF是缺氧再復氧損傷的“中心分子”,它將缺氧再復氧、凝血和炎癥等病理過程聯(lián)系在了一起,形成一個復雜的網(wǎng)絡。本研究對完善缺氧再復氧和缺血再灌注損傷的機制提供了重要依據(jù)。
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【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：2398165