【摘要】： 蛋白質(zhì)酪氨酸硝化是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基一旦發(fā)生翻譯后修飾,就會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要的影響,進(jìn)而與多種疾病的發(fā)生發(fā)展緊密聯(lián)系。在病理?xiàng)l件下,蛋白質(zhì)容易受到各種活性氧和活性氮自由基的損傷,發(fā)生蛋白質(zhì)酪氨酸硝化。蛋白質(zhì)酪氨酸硝化常常伴隨有蛋白質(zhì)氧化,使得對(duì)蛋白質(zhì)酪氨酸硝化功能的研究變得復(fù)雜。此外,在蛋白質(zhì)硝化和氧化的過(guò)程中,生物體內(nèi)廣泛存在的微量元素鐵起著非常重要的催化作用。到目前為止,蛋白質(zhì)硝化和氧化修飾與鐵的關(guān)系,及其對(duì)蛋白質(zhì)功能的不同影響尚未完全明了。本文從體外化學(xué)體系和動(dòng)物模型兩個(gè)方面入手,首先以烯醇酶為研究對(duì)象,在體外化學(xué)體系中研究了由鐵誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)硝化和氧化修飾對(duì)烯醇酶功能的影響；并在此基礎(chǔ)上考察了抗氧化劑去鐵胺(DFO)對(duì)蛋白質(zhì)硝化和氧化損傷的干預(yù)作用；最后,在動(dòng)物模型上研究了糖尿病大鼠組織中烯醇酶硝化和氧化的情況,探討了生物體內(nèi)的硝化和氧化修飾對(duì)烯醇酶功能的影響。主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面： (1)鐵在烯醇酶硝化和氧化修飾中的作用 選取酵母烯醇酶為研究對(duì)象,研究了不同形態(tài)鐵催化NO2--H2O2和ONOO-對(duì)烯醇酶硝化、氧化及酶活的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在催化NO2--H2O2和ONOO"導(dǎo)致的烯醇酶硝化／氧化損傷中,實(shí)驗(yàn)濃度(10μmol/L)下的檸檬酸鐵(Citrate-Fe)和鐵蛋白(ferritin)對(duì)兩種損傷體系沒有顯著影響,而乙二胺四乙酸鐵(EDTA-Fe)能促進(jìn)ONOO-導(dǎo)致的烯醇酶硝化,但對(duì)NO2--H2O2體系導(dǎo)致的蛋白質(zhì)硝化和氧化無(wú)顯著作用。氯高鐵血紅素(hemin)和血紅蛋白(hemoglobin)不僅能有效催化NO2--H2O2硝化和氧化蛋白質(zhì),同時(shí)它們也能有效促進(jìn)ONOO-導(dǎo)致的蛋白質(zhì)酪氨酸硝化,但對(duì)ONOO-導(dǎo)致的蛋白質(zhì)氧化有顯著的抑制作用。游離的二價(jià)鐵(Fe2+)和三價(jià)鐵(Fe3+)能有效促進(jìn)NO2--H2O2導(dǎo)致的烯醇酶氧化,但同時(shí)顯著地抑制ONOO-導(dǎo)致的烯醇酶硝化。此外,與蛋白質(zhì)硝化相比,烯醇酶活性與蛋白質(zhì)羰基化關(guān)系更密切,蛋白質(zhì)氧化程度越強(qiáng),酶活力下降越明顯。在hemin-NO2--H2O2導(dǎo)致的烯醇酶硝化／氧化損傷中,蛋白質(zhì)氧化(非巰基氧化)對(duì)酶活的影響要顯著強(qiáng)于蛋白質(zhì)酪氨酸硝化,但酪氨酸修飾對(duì)酶活也有一定的影響。這些結(jié)果表明,不同硝化途徑導(dǎo)致的烯醇酶硝化／氧化修飾受鐵的影響不同,除儲(chǔ)存態(tài)鐵如ferritin外,其他形態(tài)的鐵都可能通過(guò)促進(jìn)氧化或硝化影響烯醇酶的功能。 (2)去鐵胺對(duì)蛋白質(zhì)硝化和氧化修飾的干預(yù)作用 研究了鐵螯合劑DFO對(duì)hemin-NO2--H2O2體系中蛋白質(zhì)硝化和氧化的影響,并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行初步探討。在hemin-NO2--H2O2體系中,這種抗氧化劑在低濃度(0.01-0.1mmol/L)時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白、谷氨酸脫氫酶、人血漿蛋白)的硝化和氧化有完全不同的作用,它能有效抑制蛋白質(zhì)硝化,而對(duì)蛋白質(zhì)的羰基化卻有促進(jìn)作用。在高濃度時(shí),DFO則會(huì)發(fā)揮其抗氧化作用,抑制蛋白質(zhì)的硝化和氧化。進(jìn)一步研究證實(shí),這種促氧化作用與heme-DFO復(fù)合物的形成密切相關(guān)。以上結(jié)果首次闡明了低濃度的DFO對(duì)heme-NO2--H2O2體系導(dǎo)致的蛋白質(zhì)硝化和氧化有完全不同的干預(yù)作用,研究結(jié)果對(duì)于深入認(rèn)識(shí)DFO在臨床和醫(yī)藥上的毒副作用有重要的生理意義。 (3)Hemin-DFO復(fù)合物促氧化機(jī)理的初步研究 從自由基產(chǎn)生的角度初步研究了hemin-DFO復(fù)合物的促氧化機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在DFO促進(jìn)hemin-H2O2體系導(dǎo)致的氧化損傷中,DFO促氧化作用的發(fā)揮需要與hemin和H2O2共存,其促氧化機(jī)理可能是促進(jìn)了O2·-的生成。DFO完善的促氧化機(jī)制,有待進(jìn)一步研究。 (4)糖尿病大鼠組織中α-烯醇酶的硝化和氧化修飾 通過(guò)腹腔注射鏈脲霉素建立糖尿病大鼠模型,同時(shí)選取α-烯醇酶作為靶蛋白,利用免疫沉淀和Western blotting技術(shù)檢測(cè)糖尿病組織中α-烯醇酶的硝化和氧化,并采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定糖尿病大鼠心肌中α-烯醇酶的硝化位點(diǎn),初步探討生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)酪氨酸硝化和氧化對(duì)α-烯醇酶功能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,糖尿病大鼠心肌組織中蛋白質(zhì)硝化水平明顯提高,而其羰基化水平無(wú)顯著變化,同時(shí),糖尿病肝臟和血清中蛋白質(zhì)硝化和羰基化水平均顯著性提高。通過(guò)免疫沉淀的方法,確證了糖尿病組織和血清中α-烯醇酶是一種易于發(fā)生酪氨酸硝化的蛋白質(zhì)。與正常大鼠相比,糖尿病心肌、肝臟和血清中α-烯醇酶的表達(dá)和硝化水平顯著上升,同時(shí)其氧化水平和酶活略微提高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。此外,還通過(guò)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),鑒定了糖尿病大鼠心肌中α-烯醇酶的硝化位點(diǎn)在Tyr257和Tyr131。而在體外ONOO-體系中,兒茶素選擇性地抑制烯醇酶的硝化(Tyr259和Tyr191),并部分恢復(fù)酶活。這些結(jié)果表明,相比于蛋白質(zhì)氧化,糖尿病組織中α-烯醇酶的硝化是一種更敏感的氧化損傷。盡管蛋白質(zhì)的羰基化對(duì)酶活的影響要強(qiáng)于蛋白質(zhì)硝化,但酪氨酸殘基的硝化修飾對(duì)烯醇酶失活也有一定的貢獻(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R341

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李洪波;羅莎;陳春華;倪崢;蔣建華;;時(shí)辰取穴針刺對(duì)高血壓病血壓晝夜節(jié)律變異的干預(yù)作用[J];廣西中醫(yī)藥;2011年04期

2 戚惠娟;尤文英;李虹;;陽(yáng)性強(qiáng)化行為療法對(duì)慢性精神分裂癥病人的干預(yù)作用[J];護(hù)理研究;2011年18期

3 劉湘;;音樂(lè)療法對(duì)大學(xué)生亞健康的干預(yù)作用及方法[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2011年12期

4 陳放;劉開揚(yáng);徐珊;呂偉紅;程宏;張洪泉;;葛根素對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2011年09期

5 湯召兵;茍欣;王明;何衛(wèi)陽(yáng);劉朝東;鄧遠(yuǎn)忠;李杰;陳勇;任軻;;氯化鋁對(duì)人精子毒性作用及美洛昔康對(duì)其干預(yù)作用的體外試驗(yàn)研究[J];中國(guó)藥房;2011年29期

6 李曉林;孫松濤;錢濤;;實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后神經(jīng)元凋亡及中藥的干預(yù)作用[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2011年19期

7 朱曉冬;曹艷麗;毛翔;蔣希成;;針刺對(duì)D-半乳糖復(fù)制阿爾茨海默病模型大鼠認(rèn)知功能干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中醫(yī)藥信息;2011年04期

8 劉榮;易瑋;黃康柏;許能貴;蘇敏芝;諸葛建;;JAKs激酶在腦缺血損傷中的影響及針刺干預(yù)作用[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

9 劉煜德;劉林錫;趙秀珍;;利血平對(duì)大鼠性功能的影響及補(bǔ)腎益心片的干預(yù)作用[J];中國(guó)男科學(xué)雜志;2010年08期

10 劉學(xué)文;朱錦莉;田步先;李熙東;蔡愛民;韓錕;張雪杰;李秋實(shí);;p38MAPK信號(hào)通路在癲癇大鼠中的激活及普瑞巴林的干預(yù)作用[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 封錦芳;余煥玲;肖榮;畢研霞;鮮米西;麻微微;苑林宏;;生命早期高脂飲食對(duì)子代小鼠生長(zhǎng)發(fā)育和血清膽固醇水平的影響及植物甾醇的干預(yù)作用[A];北京市營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第四屆會(huì)員代表大會(huì)暨膳食與健康研討會(huì)論文集[C];2010年

2 陸叢笑;岳旺;;MAO-B抑制劑催化MPTP生物轉(zhuǎn)化的體外實(shí)驗(yàn)及吲哚醌的干預(yù)作用研究[A];第八屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第七屆Servier獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)大會(huì)會(huì)議摘要集[C];2003年

3 崔彩云;杜永成;胡曉蕓;;被動(dòng)吸煙對(duì)致敏大鼠氣道HDAC2和血清IL-8表達(dá)的影響及布地奈德的干預(yù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

4 周其全;鞏沅鑫;;銀杏葉提取物對(duì)模擬高原低氧暴露下大鼠腦微血管滲漏的干預(yù)作用[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

5 袁志兵;張海港;李曉輝;;全身炎癥免疫反應(yīng)對(duì)AS斑塊穩(wěn)定性的影響及三七皂苷的干預(yù)作用[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

6 陸明霞;于建春;于濤;王舒;劉慶忠;魯斌;溫廷益;董承超;;SAMP10衰老相關(guān)性能量代謝障礙的分子因素及針刺干預(yù)作用[A];第四次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

7 方彥玲;楊立勇;嚴(yán)孫杰;;吡格列酮對(duì)CXCL10介導(dǎo)的βTc6細(xì)胞凋亡及TLR4/NF-κB表達(dá)的干預(yù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 張衛(wèi)民;雷鵬;;NF-kB和TNF-α在大鼠顱腦損傷后的表達(dá)變化及EPO的干預(yù)作用[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

9 孫蔚;高鑫;趙曉龍;李文彥;崔大敷;夏其昌;;C肽對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠糖尿病腎病的干預(yù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

10 梁幼雅;;三種中醫(yī)治法對(duì)缺氧/復(fù)氧大鼠心肌細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用[A];全國(guó)第3屆臨床中藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 李水根;保肺定喘湯可減輕氣道重構(gòu)[N];健康報(bào);2006年

2 本報(bào)記者 陳國(guó)東;品牌藥企加緊產(chǎn)品二次開發(fā)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

3 本報(bào)記者 楊朝暉;防治乙肝,怎樣更有效[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 上海市營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)理事復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科副主任 高鍵;哈佛專家盯上糙米飯[N];健康時(shí)報(bào);2009年

5 衙外;為百姓算賬的官員不該受到責(zé)怪[N];北方法制報(bào);2007年

6 盧素仙;突破骨壞死防治世界難題[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

7 蘇利川;貴州同濟(jì)堂啟動(dòng)前瞻性研究[N];中華工商時(shí)報(bào);2007年

8 趙昱 仝小林;糖毒性對(duì)β細(xì)胞功能的影響及中藥的干預(yù)作用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

9 記者 高凱 通訊員 馮景義 王s，

本文編號(hào)：2397393