【摘要】：目的：運用形態(tài)學和分子生物學方法,鑒定云南省怒江、迪慶、大理、臨滄、楚雄和西雙版納6地域帶絳蟲的種類,計算遺傳距離并構建系統(tǒng)發(fā)育樹；了解三種帶(?)蟲在云南省的分布情況；為亞洲帶絳蟲具體的分類定位提供參考依據(jù)；為帶絳蟲病和囊蟲病的防治提供科學依據(jù)。 方法：(1)形態(tài)學鑒定：對采自云南省6地域的14株帶絳蟲的頭節(jié)和成節(jié)進行鹽酸卡紅染色,孕節(jié)進行孔雀綠染色,進行形態(tài)學鑒定,與豬帶絳蟲和傳統(tǒng)牛帶絳蟲比較,初步判斷帶絳蟲的種類；并結合亞洲帶絳蟲標準株(大理株)的頭節(jié)電鏡圖,探討亞洲帶絳蟲頭節(jié)形態(tài)。(2)帶絳蟲基因組DNA PCR-RAPD分析：在形態(tài)學鑒定的基礎上取14株帶絳蟲標本株,2株亞洲帶絳蟲標準株(大理株和都勻株)和1株牛帶絳蟲標準株的成節(jié)或孕節(jié)節(jié)片,提取總DNA,隨機選擇12條引物進行PCR-RAPD分析,SPSS軟件計算不同地理株的遺傳距離,并構建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖。(3)帶絳蟲mtDNA COXI基因序列測定分析：以14株帶絳蟲標本株總DNA為模板,分別PCR擴增mtDNA COXI區(qū)段,并做序列測定,結合GenBank中已知的豬帶絳蟲、牛帶絳蟲、亞洲帶絳蟲mtDNA COXI序列,經(jīng)DNA MAN軟件處理后計算遺傳距離,并構建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖。 結果：(1)形態(tài)學鑒定顯示：DL1頭節(jié)呈球形,具有頂突和2圈小鉤,成節(jié)卵巢分為3葉,孕節(jié)分支不整齊,每側分支約為7～13支,多基部分叉,屬豬帶絳蟲；NJ1～NJ4及DQ1～DQ3共7株標本頭節(jié)方形,有微小突起,無小鉤,成節(jié)卵巢分2葉,孕節(jié)分支整齊,每側分支約15～25支,屬亞洲帶絳蟲；DL2～DL4、LC1、CX1和BN1頭節(jié)呈方形,無頂突和小鉤,成節(jié)卵巢分2葉,孕節(jié)分支整齊,每側分支約15～28支,不能斷定為傳統(tǒng)牛帶絳蟲或亞洲帶絳蟲。(2)帶絳蟲基因組DNA PCR-RAPD分析顯示：12條隨機引物共擴增片段134個(以相同bp數(shù)為依據(jù)),單條引物擴增片段范圍為3～22個,平均擴增片段在11.17個。P1～9和P11可擴增出特異條帶。親緣關系樹狀圖顯示：NJ1～4、DQ1～3、DL2～4與BZl和BZ3匯為一支,屬于亞洲帶絳蟲；LC1、BN1、CX1和BZ2匯為一支,屬于傳統(tǒng)牛帶絳蟲；兩支結合后與DL1結合。(3)帶絳蟲mtDNA COXI基因序列測定分析顯示：NJ4、NJ1和DQ2的遺傳距離為0.002,DL4和NJ3的遺傳距離為0.005,NJ2和DQ3的遺傳距離為0.012,DL2與GB3的遺傳距離為0.017,而與GB2的遺傳距離較遠,為0.037；NJ1～4、DL2～3及DQ1～3共10株標本株與GB3聚為一支,屬于亞洲帶絳蟲；BN1、CX1、LC1與GB2聚為一支,屬于傳統(tǒng)牛帶絳蟲：兩支交匯后再與由DL1和GB1聚合的一支匯合。 結論：(1)云南省存在三種帶絳蟲的流行,其中怒江和迪慶為亞洲帶絳蟲,西雙版納,楚雄和臨滄為牛帶絳蟲,大理存在三種帶絳蟲的重復流行；(2)云南亞洲帶絳蟲頭節(jié)存在有頂突和無頂突兩種形態(tài),傳統(tǒng)形態(tài)學方法很難將無頂突的亞洲帶絳蟲和傳統(tǒng)牛帶絳蟲區(qū)分。(3)PCR-RAPD技術和mtDNA COXI片段序列的測定分析均可以彌補形態(tài)學鑒定的不足,為三種帶絳蟲的鑒定提供可靠的分子依據(jù)；(4)PCR-RAPD技術和mtDNA COXI片段序列的測定分析可用于帶絳蟲的遺傳多態(tài)性研究,為亞洲帶絳蟲具體的分類定位提供參考依據(jù)。(5) PCR-RAPD技術可以篩選出特異的基因片段用于帶絳蟲的分類鑒定
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【學位授予單位】：大理學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R383.32

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 李彥;云南亞洲帶絳蟲MPCR鑒定及遺傳多態(tài)性比較性分析研究[D];大理學院;2012年

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本文編號：2386982