【摘要】：目的：研究不同胎齡大鼠胚胎皮膚中Ⅰ型膠原(collagenⅠ; Col-Ⅰ)、Ⅲ型膠原(collagenⅢ; Col-Ⅲ)及波形蛋白(vimentin; Vim)表達(dá)的變化特征與超微結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律,并探討其與胎齡的相關(guān)性及在胚胎皮膚無(wú)瘢痕愈合中的意義。方法：(1)動(dòng)物模型制備：成年健康雌雄大鼠1：1合籠配種,每日上午8：00觀察配種結(jié)果,發(fā)現(xiàn)陰栓記為雌鼠懷孕0天。配種成功后雌雄分籠,隨機(jī)飼養(yǎng)雌鼠至胎齡10天、12天、14天、16天、18天,即將孕鼠隨機(jī)分為胎齡10天組(G10組)、胎齡12天組(G12組)、胎齡14天組(G14組)、胎齡16天組(G16組)、胎齡18天組(G18組)五組。(2)組織標(biāo)本的制備：各組孕鼠分別于不同胎齡(胎齡10天,12天,14天,16天,18天)麻醉后,取胎鼠臀背部皮膚,用雙面刀片修成1 mm3大小的3塊,放入2.5%戊二醛4℃固定,用作透射電鏡分析,在JEOL-1400下觀察表皮及真皮成纖維細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特征和變化規(guī)律；其余部分取大約0.5 cm-1.0 cm胎鼠皮膚組織放入10%的中性福爾馬林中經(jīng)固定后,石蠟包埋切片,對(duì)各切片做以下檢測(cè)：①應(yīng)用HE染色觀察不同胎齡皮膚的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；②采用SABC免疫組化染色法檢測(cè)不同胎齡胚胎皮膚Ⅰ、Ⅲ型膠原和波形蛋白的表達(dá)。每張切片采用日本OLYMPUS公司的Ax-70顯微成像系統(tǒng)低倍(100倍)和高倍(400倍)視野進(jìn)行觀察分析及照相,用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng),分別測(cè)定Ⅰ、Ⅲ型膠原,波形蛋白的平均光密度值和真皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。(3)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用spss 13.0.統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同一指標(biāo)多組均數(shù)問(wèn)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。指標(biāo)之間采用Pearson相關(guān)分析(Pearson Correlation Analysis),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：(1)Ⅰ型膠原表達(dá)情況：Ⅰ型膠原的表達(dá)隨著胎齡的增加逐漸增強(qiáng),圖像分析結(jié)果顯示,胎齡10天組平均光密度最低,隨著胎齡的增加,平均光密度值增加,至胎齡18天組升至最高,各胎齡組間差異有顯著性(P0.05)；真皮內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)隨著胎齡的增加逐漸減少,各胎齡組間差異有顯著性(P0.05)。(2)Ⅲ型膠原表達(dá)情況：Ⅲ型膠原的表達(dá)隨著胎齡的增加逐漸減弱,在10天胎齡皮膚組織中平均光密度最高,隨著胎齡增長(zhǎng)平均光密度逐漸降低,各胎齡組間差異有顯著性(P0.05)；真皮內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)隨著胎齡的增加逐漸增多,各胎齡組間差異有顯著性(P0,.05)。(3)波形蛋白表達(dá)情況：波形蛋白的平均光密度隨著胎齡的增加逐漸降低,除胎齡10天組與胎齡12天組之間以及胎齡16天組與胎齡18天組之間差異無(wú)顯著性差異(P0.05),其余各組之間的差異均有顯著性差異(P0.05)；真皮內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)隨著胎齡的增加逐漸增多,各胎齡組間差異有顯著性(P0.05)。(4)Ⅰ型膠原的平均光密度分別與Ⅲ型膠原和波形蛋白的平均光密度之間為負(fù)相關(guān)關(guān)系(P0.05)；Ⅰ型膠原的真皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別與Ⅲ型膠原和波形蛋白的真皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之間為負(fù)相關(guān)關(guān)系(P0.05)；Ⅲ型膠原的平均光密度與波形蛋白的平均光密度之間為正相關(guān)關(guān)系(P0.05)；Ⅲ型膠原的真皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與波形蛋白的真皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)之間亦為正相關(guān)關(guān)系(P0.05)。(5)超微結(jié)構(gòu)變化：胚胎皮膚表皮各層細(xì)胞清晰可見(jiàn),表皮細(xì)胞層數(shù)也隨著胎齡的增長(zhǎng)逐漸增多,真皮成纖維細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體隨著胎齡的增長(zhǎng)逐漸減少。結(jié)論：(1)Ⅰ、Ⅲ型膠原在胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)差異,特別是胚胎發(fā)育前中期Ⅲ型膠原的相對(duì)高表達(dá)和Ⅰ型膠原的低表達(dá)可能與無(wú)瘢痕愈合緊密相關(guān)。(2)波形蛋白的表達(dá)隨著胎鼠胎齡的增加逐漸增強(qiáng)。波形蛋白在胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)差異可能在胚胎無(wú)瘢痕愈合過(guò)程中起重要的作用。(3)胎鼠皮膚中真皮成纖維細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體隨著胎齡的增長(zhǎng)逐漸減少,可能與胚胎皮膚無(wú)瘢痕愈合密切相關(guān)。(4)在胚胎早期出現(xiàn)的無(wú)瘢痕性愈合的現(xiàn)象和胚胎成纖維細(xì)胞獨(dú)特的結(jié)構(gòu)功能狀態(tài)、Ⅰ、Ⅲ型膠原、波形蛋白的表達(dá)以及和相關(guān)的基因調(diào)控有密切關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2386169