【摘要】： 目的利用親和層析技術(shù)制備抗人肺癌單克隆抗體(McAb)N-35,并利用免疫親和層析技術(shù)用自行制備的抗人肺癌單克隆抗體純化其相應(yīng)的肺癌相關(guān)抗原N35蛋白。 方法培養(yǎng)P35雜交瘤細(xì)胞,收集培養(yǎng)上清,利用Protein A-Sepharose CL-4B親和層析法純化單克隆抗體N-35;用純化得到的單克隆抗體與溴化氰活化的ProteinA-Sepharose CL-4B制備免疫親和柱;再將肺腺癌GLC-82細(xì)胞的裂解液通過此免疫親和柱,純化肺癌相關(guān)抗原N35。 結(jié)果從肺腺癌GLC-82細(xì)胞的裂解液中純化得到分子量為80KD的N35蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分析達(dá)到了電泳純。 結(jié)論應(yīng)用Protein A-Sepharose CL-4B親和層析法純化單克隆抗體的效率高、純度好;應(yīng)用溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B免疫親和層析法純化肺癌相關(guān)抗原N35也有較高的效率和純度;純化得到的肺癌相關(guān)抗原N35分子量為80KD,可能是一種新的腫瘤相關(guān)抗原。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody (McAb) N-35) against human lung cancer by affinity chromatography, and to purify the corresponding lung cancer associated antigen (N35) protein with self-made monoclonal antibody against human lung cancer by immunoaffinity chromatography. Methods P35 hybridoma cells were cultured, supernatants were collected and purified by Protein A-Sepharose CL-4B affinity chromatography, and immunoaffinity columns were prepared with purified monoclonal antibodies and ProteinA-Sepharose CL-4B activated by cyanide bromide. The lung cancer associated antigen N35 was purified from the lysate of lung adenocarcinoma GLC-82 cells through the immunoaffinity column. Results N35 protein with molecular weight of 80KD was purified from the lytic fluid of lung adenocarcinoma GLC-82 cells and was purified by SDS-PAGE analysis. Conclusion the purification of monoclonal antibody by Protein A-Sepharose CL-4B affinity chromatography has high efficiency and purity, and the purification of lung cancer associated antigen N35 by Protein A-Sepharose CL-4B immunoaffinity chromatography activated by cyanide bromide has high efficiency and purity. The purified lung cancer associated antigen N35 has a molecular weight of 80 KD, which may be a new tumor associated antigen.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392.11;R734.2

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本文編號(hào)：2381570