【摘要】： 金黃色葡萄球(Staphylococcus aureus,SA)是臨床常見的致病細菌,自20世紀40年代青霉素問世以來,該菌感染性疾病曾受到較大控制,隨著青霉素的廣泛應(yīng)用,某些菌株產(chǎn)生青霉素酶,表現(xiàn)為對青霉索耐藥,于是人類又研制出耐青霉素酶的二甲氧苯基青霉素,即甲氧西林,自1959年應(yīng)用臨床后曾有效控制SA產(chǎn)酶株的感染。但是1961年首例耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)在英國發(fā)現(xiàn)后,至80年代其感染幾乎遍及全球,最高可達SA感染總數(shù)的58%[1]。MRSA是重癥監(jiān)護病房(ICU)發(fā)生醫(yī)院感染的重要病原菌,其致病力強,可引起膿毒血癥及休克等嚴重并發(fā)癥,死亡率高達63.1%[2]。MRSA傳播速度快,常出現(xiàn)多重耐藥性,可引起感染的流行及暴發(fā)流行,近年還出現(xiàn)了耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(VRSA) [3],使治療MRSA感染非常困難。由于其具有傳播途徑廣,致病性強,多重耐藥性等特點,已成為臨床治療的難點。因此對MRSA的耐藥機制進行研究具有重要意義。 現(xiàn)已明確MRSA耐甲氧西林的機制主要是產(chǎn)生一種新型的青霉素結(jié)合蛋白(PBP2a),由MRSA特有的mecA基因編碼合成,與β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力極低,當(dāng)其它青霉素結(jié)合蛋白與β-內(nèi)酰胺類抗生素結(jié)合的活性受到抑制,PBP2a可替代起到合成細胞壁的作用,從而產(chǎn)生耐藥性。但仍不足以解釋不同的MRSA菌株為何耐藥水平不同?而且MRSA產(chǎn)生PBP2a的多少與其耐藥水平的高低無關(guān),更不能解釋MRSA多重耐藥(包括對β-內(nèi)酰胺類以外的多類抗菌藥物也耐藥)的復(fù)雜機制! 近年來,細菌對藥物的主動外排所致的耐藥性引起了學(xué)者們的注意,隨著研究的逐步深入,發(fā)現(xiàn)越來越多的臨床常見致病菌存在與抗菌藥物耐藥有關(guān)的主動外排系統(tǒng)。且SA的主動外排可被利血平及碳酰氰間氯苯腙(CCCP)抑制[4]。研究發(fā)現(xiàn),多重耐藥菌株中的主動外排系統(tǒng)能夠顯著降低細胞內(nèi)抗菌藥物的濃度,同時由于主動外排系統(tǒng)轉(zhuǎn)運底物的廣泛性,使細菌呈現(xiàn)對多種化學(xué)結(jié)構(gòu)完全不同的抗菌藥物高度耐藥。研究認為MRSA的耐藥可能跟細菌獲得主動外排基因有關(guān),現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)MRSA中存在多種主動外排系統(tǒng)。Markham和Neyfakh [5]早在1996年就推測外排系統(tǒng)在MRSA多重耐藥機制中發(fā)揮重要作用。2004年許飛等[6]的研究表明,主動外排是MRSA耐喹諾酮類抗菌藥物的重要機制之一。存在nora、qac、smr等多種外排系統(tǒng)。在qac家族中,除對消毒劑耐藥外,對多種抗菌藥物存在高耐藥率。喹諾酮類藥物原為MRSA感染的有效治療藥物,但對喹諾酮類耐藥菌株迅速增多,且溴乙啶、喹諾酮是多種主動外排泵的底物,此種耐藥性可被能量抑制劑CCCP、利血平及質(zhì)子泵抑制劑拮抗。本文就ICU病房中MRSA的感染狀況、耐藥性分布及耐喹諾酮類藥物的主動外排機制做進一步研究。 目的: 了解本院重癥監(jiān)護病房(ICU)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的感染狀況,探討MRSA的主動外排機制。 方法: 收集2005年至2008年三年期間本院ICU病房感染的金黃色葡萄球菌(SA),通過苯唑西林-瓊脂稀釋法和mecA基因檢測法,從102株SA中篩選鑒定出80株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA),瓊脂稀釋法測定21種抗菌藥物MRSA菌株的最低抑菌濃度(MIC),觀察藥敏結(jié)果;通過計算機Primer Premier 5.0軟件設(shè)計norA、qacA、qacB、qacJ 4種主動外排基因的引物,進行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增,將產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳,凝膠成像分析系統(tǒng)攝像保存,并分析結(jié)果;將質(zhì)子泵抑制劑奧美拉唑按一定比例加入到喹諾酮類藥物左氧氟沙星中,進行協(xié)同抑制試驗,測定藥物主動外排基因陽性的MRSA的MIC值,分析試驗前后藥敏結(jié)果的變化。 結(jié)果: 1.收集本院ICU病房中住院患者感染的102株金黃色葡萄球菌(SA)中,源自住院患者有96例,源自醫(yī)護人員雙手攜帶有6例;苯唑西林-瓊脂稀釋法檢出MRSA78株,檢出率為76.5%,mecA基因檢測法檢出MRSA80株,檢出率為78.4%;且從MRSA感染患者年齡構(gòu)成比可以看出,以年齡≥60歲、合并有多種疾病的患者多發(fā)。 2.所檢出的MRSA對萬古霉素和替考拉寧的敏感性均為100.0%,而對其他19種抗生素(苯唑西林、青霉素、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、頭孢西丁、亞胺培南、哌拉西林三唑巴坦、阿奇霉素、紅霉素、氯霉素、克林霉素、阿米卡星、慶大霉素、左氧氟沙星、加替沙星、環(huán)丙沙星)均耐藥。 3. PCR擴增法檢出80株MRSA中的4種主動外排基因norA、qacA、qacB、qacJ分別為54株、12株、17株、9株,檢出率分別為67.5%、15.0%、21.2%、11.2% 4.當(dāng)加入奧美拉唑濃度達到20mg/L時,測出主動外排基因陽性的MRSA的MIC值較單用左氧氟沙星時出現(xiàn)變化;所選取的31株實驗組菌株中,有4株MIC值變化較為明顯,其余27株的MIC值均降低一個濃度梯度;另有11株為無主動外排基因菌株,其MIC值基本上無明顯變化。 結(jié)論: 1 ICU患者感染MRSA嚴重,加強醫(yī)護人員手的衛(wèi)生對于預(yù)防MRSA的醫(yī)院內(nèi)感染較為重要。 2 MRSA呈現(xiàn)多重耐藥性,僅對糖肽類抗生素表現(xiàn)敏感,對其他常見類抗菌藥物菌耐藥,并出現(xiàn)2株對萬古霉素敏感性處于中介值的菌株。2 MRSA中存在norA、qacA、qacB、qacJ主動外排基因,以norA基因居多,其次為qacB,而qacJ檢出率相對較低。 3泵抑制劑奧美拉唑可抑制MRSA對于喹諾酮類抗生素的主動外排作用,為臨床治療MRSA感染提供一種新的思路。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王亞男;蘆丁對金黃色葡萄球菌Sortase A抑制作用的初步研究[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號：2360253