【摘要】： 背景:脈絡(luò)膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)是最常見(jiàn)的葡萄膜惡性腫瘤,其特點(diǎn)是惡性程度高,轉(zhuǎn)移早且廣泛,對(duì)患者的視力及生命造成嚴(yán)重威脅。在研究脈絡(luò)膜黑色素瘤時(shí)遇到的最主要的困難就是與其他腫瘤相比這種腫瘤的發(fā)生率很低,這樣要想獲得相當(dāng)數(shù)量的標(biāo)本就非常困難。在過(guò)去的數(shù)十年里,科學(xué)家研究脈絡(luò)膜黑色素瘤時(shí)所面對(duì)的主要挑戰(zhàn)是建立合適的動(dòng)物模型。 目的:本研究采用人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞株OCM-1細(xì)胞作為研究對(duì)象,建立脈絡(luò)膜黑色素瘤兔模型,以期達(dá)到以下兩個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?首先是利用該模型研究不同劑量的環(huán)孢素A對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的發(fā)生及對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生存時(shí)間的影響;其次利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)組織因子在CM中的表達(dá)和定位,同時(shí)定量計(jì)數(shù)微血管密度(MVD),探討TF與MVD之間的相互關(guān)系。 方法:利用人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞株OCM-1細(xì)胞建立兔脈絡(luò)膜黑色素瘤動(dòng)物模型。選取健康成年兔35只,雌雄不限。隨機(jī)分為A組(不注射環(huán)孢素A)、B組(注射環(huán)孢素A 15mg/kg/day)、C組(注射環(huán)孢素A 20mg/kg/day)、D組(注射環(huán)孢素A 20mg/kg/day,2周后15mg/kg/day,4周后10mg/kg/day,6周后5mg/kg/day,維持),A組5只動(dòng)物,B組、C組、D組分別10只動(dòng)物。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左眼為手術(shù)眼。術(shù)后行B型超聲、MRI掃描、眼底照相,待其自然死亡后取下眼球、肺組織、肝組織作病理切片HE染色及免疫組織化學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果: 1.生存時(shí)間:A組只有一只動(dòng)物于4周時(shí)死亡,其余均于8周時(shí)處死。平均生存時(shí)間為B組為5.7±0.64周,C組為4.33±0.41周,D組為5.71±0.81周。B組與C組之間的生存時(shí)間有顯著差異(P=0.01＜0.05);C組與D組之間的生存時(shí)間有顯著差異(P=0.012＜0.05);B組與D組之間的生存時(shí)間無(wú)明顯差異(P=0.878＞0.05)。Kaplan-Meier法累積生存率可以看出B組和D組有較好的生存率。 2.B型超聲:應(yīng)用眼部B型超聲儀測(cè)量腫瘤最大基底直徑和高度,將兔眼內(nèi)的腫瘤假設(shè)成一個(gè)旋轉(zhuǎn)半橢圓體,采用旋轉(zhuǎn)橢W體公式(4/3pa~2H)的1/2計(jì)算。計(jì)算公式為:2/3pa~2H(其中H為腫瘤最大高度,a為腫瘤基底直徑的一半,π=3.14)。第一周時(shí)尚未能夠測(cè)量出腫瘤高度,僅見(jiàn)鞏膜壁局部增厚,自第二周開(kāi)始記錄腫瘤基底直徑及高度。取同期的每組所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤的平均體積繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。前4周C組和D組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速度相對(duì)較快,兩組無(wú)明顯差異。4周后C組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤平均體積繼續(xù)增大,增大速度加快。4周后D組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤平均體積增長(zhǎng)速度減慢,5周后體積開(kāi)始縮小,其中一只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤于8周時(shí)已無(wú)法用B型超聲儀測(cè)量其大小,體積記為0。B組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤平均體積逐漸增大,生長(zhǎng)速度較C組緩慢,但最終平均體積B組和C組無(wú)明顯差異。 3.HE染色:組織病理學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)眼內(nèi)腫瘤發(fā)生率分別為B組60%(6只)、C組80%(8只)、D組40%(4只)。三組之間眼內(nèi)腫瘤陽(yáng)性率無(wú)顯著差異。A組未發(fā)現(xiàn)腫瘤生長(zhǎng)。各組眼內(nèi)病變均局限于脈絡(luò)膜,無(wú)一例出現(xiàn)虹膜及睫狀體轉(zhuǎn)移。肺部轉(zhuǎn)移病灶發(fā)現(xiàn)于B組2只(33.3%)、C組1只(12.5%)、D組1只(25%)。三組之間肺部轉(zhuǎn)移發(fā)生率無(wú)顯著差異。三組均未發(fā)現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移灶。 4.組織因子(tissue factor,TF)在腫瘤中的表達(dá)及與MVD的關(guān)系:眼內(nèi)腫瘤中TF染色陽(yáng)性率為88.9%。B組、C組三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的眼內(nèi)腫瘤的TF染色強(qiáng)度隨腫瘤體積的增大逐漸增加,中度陽(yáng)性占多數(shù)。D組因腫瘤體積5周后逐漸下降,TF染色強(qiáng)度不隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加,染色強(qiáng)度以可疑陽(yáng)性為主。發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤的TF染色強(qiáng)度均明顯高于未發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼內(nèi)腫瘤的強(qiáng)度。肺轉(zhuǎn)移灶瘤細(xì)胞的TF陽(yáng)性率為100%。肺轉(zhuǎn)移瘤的TF染色強(qiáng)度均明顯高于眼內(nèi)原發(fā)腫瘤的TF表達(dá)強(qiáng)度。眼內(nèi)腫瘤TF表達(dá)強(qiáng)度與MVD數(shù)量呈正相關(guān)關(guān)系.轉(zhuǎn)移灶中的MVD數(shù)目較眼內(nèi)腫瘤中的MVD數(shù)目明顯增高。 結(jié)論:本課題通過(guò)采用人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞株OCM-1細(xì)胞,應(yīng)用不同劑量環(huán)孢素A對(duì)兔進(jìn)行免疫抑制,通過(guò)手術(shù)操作建立兔脈絡(luò)膜黑色素瘤動(dòng)物模型并進(jìn)行研究。得出以下結(jié)論: 1、成功建立兔脈絡(luò)膜黑色素瘤動(dòng)物模型,此模型基本接近人類(lèi)疾病的特征,為下一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2、腫瘤的發(fā)生率及生長(zhǎng)速度與環(huán)孢素A的劑量呈正相關(guān),生存率與環(huán)孢素A的劑量呈負(fù)相關(guān),轉(zhuǎn)移的發(fā)生與環(huán)孢素A的劑量無(wú)關(guān)。 3、眼科B型超聲儀檢測(cè)眼內(nèi)腫瘤簡(jiǎn)單易行,應(yīng)用于脈絡(luò)膜黑色素瘤動(dòng)物模型建立過(guò)程中,能測(cè)算出腫瘤的體積,觀察不同劑量的環(huán)孢素A對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)速度的影響。 4、組織因子TF表達(dá)與MVD呈正相關(guān)關(guān)系,提示TF與脈絡(luò)膜黑色素瘤的發(fā)生、血管形成、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān),是反映脈絡(luò)膜黑色素瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移潛能的生物學(xué)指標(biāo),是脈絡(luò)膜黑色素瘤臨床預(yù)后的重要指標(biāo)。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R739.7;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 胡立寬,李桂云,李貞,宋軼鵬;兔眼脈絡(luò)膜黑色素瘤的第二代光敏劑光動(dòng)力治療[J];中華眼底病雜志;2004年02期

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本文編號(hào)：2354483