發(fā)布時(shí)間：2018-11-22 17:18

【摘要】： 目的:了解天津地區(qū)耐亞胺培南銅綠假單胞菌臨床分離株的耐藥特點(diǎn);建立銅綠假單胞菌臨床分離株的生物膜形成能力的評價(jià)方法;探討銅綠假單胞菌生物膜形成能力與多糖相關(guān)基因表達(dá)之間的關(guān)系及紅霉素在生物膜形成中的作用,為防治醫(yī)院內(nèi)感染及臨床合理應(yīng)用抗生素提供理論依據(jù)。 方法:收集2006年1月～12月天津市3所三級甲等醫(yī)院臨床分離的60株耐亞胺培南銅綠假單胞菌,用微量肉湯稀釋法對所有菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn);采用微孔板結(jié)晶紫染色的方法將臨床分離的銅綠假單胞菌按照生物膜形成能力的不同進(jìn)行分類;通過實(shí)時(shí)熒光RT-PCR的方法對高生物膜形成能力和低生物膜形成能力菌株及野生型銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行研究,分析其生物膜形成過程中多糖相關(guān)基因的表達(dá)情況,探討銅綠假單胞菌生物膜形成能力與生物膜形成過程中多糖合成調(diào)控基因表達(dá)之間的關(guān)系,以及紅霉素在抑制生物膜形成中的作用。 結(jié)果:本研究中樣本來源及數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,臨床收集的大多數(shù)銅綠假單胞菌主要來自于肺感染和尿路感染患者,兩組占總數(shù)的74%。MIC藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示了60株銅綠假單胞菌對大部分抗生素的高耐藥率。對阿米卡星的敏感性最高,耐藥率為30%,對氨曲南的耐藥率為50%,對美洛培南、頭孢吡肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、慶大霉素及哌拉西林的耐藥率均在60%以上。60株臨床分離的銅綠假單胞菌根據(jù)細(xì)菌生物膜形成能力的不同分為四類,大部分銅綠假單胞菌具有較強(qiáng)的生物膜形成能力;對標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)AO1的檢測結(jié)果分析表明pslA、pelA、algD基因的表達(dá)均在生物膜形成的24小時(shí)表達(dá)水平最高,pslA、pelA的表達(dá)在生物膜形成的第3天和第6天呈逐漸下降的趨勢,在生物膜形成過程中algD的相對表達(dá)水平相對較穩(wěn)定,其表達(dá)水平的變化較小,pelA的相對表達(dá)量的變化較大;隨機(jī)選取臨床分離菌株10株,觀察其6小時(shí)生長的浮游狀態(tài)菌和早期生物膜菌的pslA基因表達(dá)的變化,結(jié)果顯示早期生物膜菌的pslA基因表達(dá)水平均高于其浮游狀態(tài)菌;在細(xì)菌培養(yǎng)基中加入2mg/L紅霉素,在生物膜形成的早期(24h)觀察亞抑制濃度紅霉素對生物膜形成的影響。通過活菌計(jì)數(shù)法發(fā)現(xiàn)加入亞抑制濃度紅霉素后生物膜中細(xì)菌的數(shù)量與未加入紅霉素組相比明顯減少,但其pslA基因的相對表達(dá)量未發(fā)生顯著變化。 結(jié)論:MIC藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示60株臨床分離的耐亞胺培南的銅綠假單胞菌對大部分抗生素的高耐藥率;本研究中大部分IRPA具有較強(qiáng)的生物膜形成能力;本研究對銅綠假單胞菌生物膜形成過程中多糖合成相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行比較分析,研究表明在生物膜形成過程中pslA、pelA、algD的表達(dá)與銅綠假單胞菌生物膜的形成密切相關(guān),其表達(dá)水平均在生物膜形成的24小時(shí)達(dá)到高峰。pslA的表達(dá)水平要高于pelA和algD的表達(dá),對浮游菌和生物膜菌之間的pslA表達(dá)水平的比較分析表明,生物膜菌的pslA表達(dá)水平均高于浮游菌的pslA表達(dá)水平,pslA在生物膜形成中具有更重要的作用;亞抑制濃度紅霉素對銅綠假單胞菌的生物膜形成具有抑制作用,但其并不影響pslA基因的表達(dá)。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R378.991

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2350027