【摘要】：研究表明,共軛亞油酸(conjugated linoleic acid, CLA)對胰島素抵抗的影響,可能存在異構(gòu)體特異性,本文旨在闡明CLA對肝細(xì)胞胰島素抵抗的影響及作用機(jī)制。 采用高濃度胰島素體外誘導(dǎo)法建立張氏肝細(xì)胞胰島素抵抗模型,應(yīng)用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)法檢測細(xì)胞葡萄糖消耗。細(xì)胞在含1%FBS和100nmol/L牛胰島素的RPMI1640中孵育24h的條件下,葡萄糖消耗最少,即胰島素抵抗最為明顯。進(jìn)一步通過模型持續(xù)時(shí)間的研究發(fā)現(xiàn),建模36h后細(xì)胞仍存在葡萄糖攝取和利用障礙,且細(xì)胞形態(tài)沒有明顯的變化,即細(xì)胞模型在36h內(nèi)具有穩(wěn)定性。 采用MTT法檢測CLA對胰島素抵抗細(xì)胞的毒性。結(jié)果表明：1,2,5和10μmol/L t10, c12-CLA或c9,t11-CLA孵育24h對胰島素抵抗細(xì)胞的活力無顯著影響。 應(yīng)用GOD-POD法檢測1,2,5和10μmol/L CLA對胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗的改善是否存在異構(gòu)體特異性。發(fā)現(xiàn),t10, c12-CLA而不是c9, t11-CLA能夠增加胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗,其作用呈明顯的時(shí)間依賴性和劑量依賴性,其中適宜濃度為2μmol／L,使胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗增加17.29%(P0.001)；適宜時(shí)間為12h,使胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗增加4.82%(P0.01)。 為深入探討t10, c12-CLA改善細(xì)胞胰島素抵抗機(jī)制,應(yīng)用蛋白免疫印記法檢測t10, c12-CLA對胰島素抵抗細(xì)胞p-Akt蛋白表達(dá)水平的影響,發(fā)現(xiàn)1μmol/L和2μmol/L t10, c12-CLA處理12h能夠增加胰島素抵抗細(xì)胞p-Akt蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步應(yīng)用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制劑LY294002進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn),分析PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在t10, c12-CLA增強(qiáng)胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗中的作用。發(fā)現(xiàn),PI3K抑制劑LY294002能夠顯著抑制t10, c12-CLA對胰島素抵抗細(xì)胞葡萄糖消耗的改善作用,從而證明t10, c12-CLA對胰島素抵抗張氏肝細(xì)胞葡萄糖攝取和利用的改善作用與其能夠激活PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。 綜上所述,本文闡明了t10, c12-CLA能夠通過激活PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改善肝細(xì)胞胰島素抵抗。
[Abstract]:It is shown that the effect of co-linoleic acid (CLA) on insulin resistance may be specific, and the purpose of this study is to clarify the effect of CLA on insulin resistance and the mechanism of action. The insulin resistance model of human hepatocytes was established by the method of high-concentration insulin in vitro, and the glucose oxidase-peroxidase (GOD-POD) method was used to detect the cell glucose. The cells were consumed in RPMI1640 containing 1% FBS and 100nmol/ L of bovine insulin for 24 h, with minimal glucose consumption, i.e., insulin resistance Obviously, the study of the duration of the model found that the cells still had glucose uptake and utilization barrier after 36h of modeling, and there was no obvious change in the morphology of the cells, that is, the cell model was stable within 36h. Qualitative analysis of CLA on insulin resistance by MTT assay The results showed that 1, 2, 5 and 10. m u.mol/ L t10, c12-CLA or c9, t11-CLA were incubated for 24h to the activity of insulin resistance cells. No significant effect of CLA on glucose consumption of insulin-resistant cells by using GOD-POD method to detect 1, 2, 5 and 10. m u.mol/ L CLA It was found that t10, c12-CLA instead of c9, t11-CLA can increase insulin resistance to cell glucose consumption, and its effect is time-dependent and dose-dependent, where the appropriate concentration is 2.mu. mol/ L, and the insulin resistance to cell glucose consumption is increased by 17.29% (P0.001); the appropriate time is 12h, so that the insulin resistance cell glucose consumption is increased by 4.82 The effect of t10, c12-CLA on the expression level of p-Akt protein in insulin-resistant cells was detected by using the protein-immune-imprinting method. It was found that 1. mu.mol/ L and 2. m u.mol/ L t10, c12-CLA treated for 12h could increase the insulin resistance. The expression of p-Akt protein was studied. The inhibition of the expression of the P3K/ Akt signal transduction pathway in t10, c12-CLA was analyzed. It is found that the PI3K inhibitor LY294002 can significantly inhibit the improvement of the glucose consumption of t10, c12-CLA to insulin resistance cells, and it is shown that the improvement of t10, c12-CLA on glucose uptake and utilization of insulin-resistant Zhang's hepatocytes and its ability to activate PI3K/ The Akt signal transduction pathway is related. In conclusion, this paper states that t10, c12-CLA can be used to activate the PI3K/ Akt signal
【學(xué)位授予單位】：大連工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

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本文編號：2341953