【摘要】： 目的探討供體脾細(xì)胞及其輸注途徑以及聯(lián)合抗CD154單克隆抗體(antiCD154 mAb,克隆號(hào)AH.F5)對(duì)非清髓性骨髓移植預(yù)處理方案建立異基因嵌合體的影響及誘導(dǎo)供體特異性免疫耐受的可能機(jī)制.方法Lewis(Rtl~l)大鼠為供體,Wistar(Rtl~u)大鼠為受體,SD大鼠為無(wú)關(guān)第三品系。按不同預(yù)處理方案將Lewis供鼠脾細(xì)胞(Sc)、骨髓細(xì)胞(BMc)懸液輸注給Wistar大鼠。受鼠隨機(jī)分為4組,每組20只:(1)Sc_外組:第0天(d_0)經(jīng)受體外周陰莖背靜脈輸注2×10~8供鼠Sc;(2)Sc_門組:d_0經(jīng)受體門靜脈輸注2×10~8供鼠Sc;(3)Sc_門+BMc_外組:d_0經(jīng)受體門靜脈輸注2×10~8供鼠Sc,第3天(d_3)再經(jīng)陰莖背靜脈輸注1×10~8供鼠BMc;(4)Se_門+anti CD154mAbq-BMc_外組:d_0經(jīng)受體門靜脈輸注2×10~8供鼠Sc,2h后腹腔注射anti CD154mAb 3mg,d3再經(jīng)陰莖背靜脈輸注1×10~8供鼠BMc。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測(cè)脾細(xì)胞輸注術(shù)后第20(d_(20))、40天(d_(40))Wistar大鼠血清IL-10和IFN-γ水平;通過(guò)d_(20)、d_(40)單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR),大鼠重組白細(xì)胞介素2(IL-2)逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)和d_(50)遲發(fā)性超敏反應(yīng)(DTH)對(duì)受鼠耐受程度進(jìn)行評(píng)估;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)d_(20)、d_(40)受鼠脾、胸腺細(xì)胞中Rt1~(1+)嵌合比例進(jìn)行測(cè)定,d_(100)對(duì)Sc_門+anti CD154 mAb+BMc_外組加做此項(xiàng)檢查。結(jié)果Sc_外組血清細(xì)胞因子水平在兩時(shí)間點(diǎn)均無(wú)變化,與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);Sc_門+anti CD154 mAb+BMc_外組血清IL-10、IFN-γ水平在d_(20)分別為(42.01±4.87)pg/mL和(28.97±3.83)pg/mL,d_(40)分別為(40.19±a:5.30)g/mL和(25.89±4.30)pg/mL,其中IL-10濃度明顯高于其它各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),IFN-γ濃度均處于較低水平,Th1/Th2平衡向Th2偏移;而Scn和Sc_門+BMc_外組細(xì)胞因子水平向Th1偏移。單向MLR中Sc_門+anti CD154mAbq-BMc_外組對(duì)Lewis供鼠脾細(xì)胞的刺激指數(shù)(SI)在d_(20)、d_(40)分別為(4.43±0.19)和(4.97±0.25),均顯著低于其余各組(P＜0.01),加入外源性IL-2后可部分逆轉(zhuǎn)其低反應(yīng)性,但對(duì)第三方SD大鼠來(lái)源的脾細(xì)胞仍保持強(qiáng)烈增殖活性,SI值與陽(yáng)性對(duì)照體系無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。DTH實(shí)驗(yàn)中只有Sc_門+anti CD154 mAb+BMc_外組表現(xiàn)為顯著低反應(yīng)性,其余各組腳掌厚度差值(FI)與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。嵌合體檢測(cè)結(jié)果表明Sc_外組在脾和胸腺中均不能形成嵌合體;Sc_門和Sc_門+BMc_外組在d_(20)能建立較低水平嵌合體,于d_(40)很快下降甚至消失;而sc_門+anti CD154 mAb+BMc_外組在d_(20)、d_(40)的脾和胸腺中均可形成穩(wěn)定的高水平嵌合,并持續(xù)超過(guò)100天。結(jié)論單純經(jīng)外周靜脈輸注2×10~8供體sc不能誘導(dǎo)嵌合體和免疫耐受的形成;將其輸注途徑改為門靜脈后,可誘導(dǎo)出受鼠輕度的免疫耐受狀態(tài),建立短暫(＜20天)、低水平(＜20%)的外周性嵌合體;在此基礎(chǔ)上聯(lián)合輸注1×10~8供體BMc可部分增強(qiáng)耐受狀態(tài),延長(zhǎng)嵌合體水平至40天,但仍不穩(wěn)定;而只有加入anti CD154 mAb后才可顯著增強(qiáng)BMc植入率,三者具有協(xié)同作用。外周嵌合體＞30%、中樞嵌合體＞20%是保證骨髓細(xì)胞發(fā)揮強(qiáng)大致耐受作用的基礎(chǔ)。Sc_門+anti CD154 mAb+BMc_外預(yù)處理方案可能與Th1/Th2細(xì)胞因子偏移、T細(xì)胞克隆無(wú)能和克隆清除等多種機(jī)制有關(guān),在無(wú)大劑量骨髓細(xì)胞、骨髓抑制劑和放射線參與下,可獲得穩(wěn)定的高水平異基因混合性嵌合體,成功誘導(dǎo)受體針對(duì)供體抗原的特異性免疫耐受。 目的為研究胰腺移植術(shù)后排斥反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)手段,建立異基因大鼠全胰十二指腸移植(WPDT)模型,并探討手術(shù)過(guò)程操作要點(diǎn)。方法在雙套管+腹主動(dòng)脈三通管外接法建模的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)之上改進(jìn)動(dòng)脈吻合方式,將供受體腹主動(dòng)脈端側(cè)吻合,供體門靜脈與受體左腎靜脈袖套吻合,供體十二指腸與受體小腸端側(cè)吻合,成功建立Lewis→Wistar糖尿病大鼠異基因WPDT模型。記錄STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的情況,對(duì)移植成功的受鼠3次/周監(jiān)測(cè)隨機(jī)血糖,并記錄存活時(shí)間(ST),術(shù)后第7天取材3只大鼠移植物行病理學(xué)檢查。結(jié)果STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠成模率為85.7%,酮癥酸中毒(DKA)發(fā)生率為5.6%,病死率7.4%。50只糖尿病大鼠行WPDT術(shù)式,44例移植成功,術(shù)后24h血糖由術(shù)前(22.83±4.37)mmol/L降至(6.36±2.18)mmol/L。其中有8例于術(shù)后3d內(nèi)死亡,其余36例受鼠存活時(shí)間為6～16d,平均為(10.45±3.3)d,術(shù)后4d、7d、10d、13d血糖水平呈進(jìn)行性升高,術(shù)后7～10d為死亡高峰,移植物病理改變呈典型的急性排斥反應(yīng).結(jié)論熟練顯微技術(shù),重視操作細(xì)節(jié),是成功建立WPDT模型的關(guān)鍵因素。本法建立的WPDT模型可見(jiàn)到移植胰發(fā)揮內(nèi)分泌功能以及典型的急性排斥反應(yīng)病理改變,該模型穩(wěn)定、可靠,適用于排斥反應(yīng)的研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2341547