【摘要】： 目的：UL49基因是人巨細(xì)胞病毒必需基因,編碼病毒顆粒皮層蛋白,本課題對(duì)UL49基因在病毒復(fù)制過(guò)程中的功能進(jìn)行了初步研究。 方法：(1)以HCMV病毒感染人包皮成纖維細(xì)胞(HFF),在感染后不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞,以即刻早期IE基因、早期E基因、晚期L基因表達(dá)時(shí)相作為對(duì)照,利用RT-PCR和Western Blot方法確定UL49基因mRNA和蛋白表達(dá)時(shí)相。(2)化學(xué)合成以UL49基因mRNA為靶的EGS和陰性對(duì)照EGS,轉(zhuǎn)染HFF細(xì)胞、感染HCMV病毒,利用熒光定量PCR和Western Blot檢測(cè)EGS對(duì)UL49基因的表達(dá)抑制,進(jìn)而檢測(cè)細(xì)胞中g(shù)B蛋白、IE2-86蛋白、pp28蛋白的表達(dá)水平變化。(3)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,比較UL49基因沉默后,病毒DNA總量在感染后24h、48h、72h變化,探討UL49基因在病毒DNA復(fù)制中的功能。 結(jié)果：(1)UL49基因是早期E-β2基因,編碼蛋白在病毒感染24h能夠檢測(cè)到。(2)pUL49蛋白的表達(dá)下調(diào),不影響IE2-86蛋白、gB蛋白的表達(dá),但是使pp28蛋白表達(dá)下調(diào)。(3)UL49基因沉默不影響細(xì)胞內(nèi)病毒總DNA含量,UL49基因與病毒DNA復(fù)制功能無(wú)關(guān)。 結(jié)論：UL49基因不參與病毒DNA復(fù)制。pUL49蛋白發(fā)揮作用的時(shí)期為病毒DNA復(fù)制后L-γ2基因的表達(dá)或者病毒的組裝過(guò)程。
[Abstract]:Objective: UL49 gene is an essential gene of human cytomegalovirus and encodes virus granular cortical protein. The function of UL49 gene in viral replication was studied in this paper. Methods: (1) Human prepuce fibroblasts (HFF),) infected with HCMV virus were harvested at different time points after infection. The expression of immediate early IE gene, early E gene and late L gene were used as controls. RT-PCR and Western Blot methods were used to determine the expression phase of mRNA and protein of UL49 gene. (2) EGS targeting UL49 gene mRNA and EGS, as negative control were chemically synthesized and transfected into HFF cells and infected with HCMV virus. Fluorescence quantitative PCR and Western Blot were used to detect the inhibition of UL49 gene expression by EGS, and then the expression levels of gB protein, IE2-86 protein and pp28 protein were detected. (3) according to the above results, UL49 gene silencing was compared. The total amount of virus DNA changed at 24 h, 48 h and 72 h after infection. The function of UL49 gene in viral DNA replication was studied. Results: (1) UL49 gene is an early E- 尾 2 gene, and the encoded protein can be detected at 24 h after infection. (2) the expression of pUL49 protein is down-regulated, and the expression of IE2-86 protein and gB protein is not affected. However, the expression of pp28 protein was down-regulated. (3) UL49 gene silencing did not affect the total DNA content of the virus, and the UL49 gene had nothing to do with the replication function of the virus DNA. Conclusion: UL49 gene does not participate in the replication of virus DNA. The stage of pUL49 protein acting is the expression of L- 緯 2 gene or the assembly of virus after DNA replication.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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