【摘要】：本研究構(gòu)建了表達(dá)甲型流感病毒M2蛋白胞外區(qū)與銅綠假單胞菌外毒素A(PEA)融合蛋白的原核表達(dá)載體,根據(jù)銅綠假單胞菌外毒素A(PEA)核苷酸序列設(shè)計(jì)突變PCR引物并實(shí)施突變PCR,以獲得PEA基因編碼區(qū)第553位氨基酸密碼子缺失的突變PEA(ntPE),從而產(chǎn)生無(wú)毒性的PEA突變基因,然后用合成的M2e編碼區(qū)替換ntPE基因中的非必需區(qū)Ib,產(chǎn)生ntPE-M2e嵌合基因。將該嵌合基因?qū)雙ET表達(dá)載體以構(gòu)建原核表達(dá)載體,將表達(dá)產(chǎn)物膠回收后與弗氏不完全佐劑聯(lián)合皮下免疫BALB/c小鼠,終免兩周后用5個(gè)LD50流感病毒A/PR/34/8株進(jìn)行攻擊。取動(dòng)物血清作ELISA并取脾臟作ELISPOT試驗(yàn)結(jié)果表明,免疫組可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗M2e特異性抗體反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)并能夠抑制病毒在肺內(nèi)的復(fù)制。本研究為甲型流感病毒廣譜疫苗的進(jìn)一步研發(fā)打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, a prokaryotic expression vector expressing A (PEA) fusion protein of influenza A virus M2 protein and Pseudomonas aeruginosa exotoxin was constructed. According to the nucleotide sequence of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A (PEA), the mutated PCR primers were designed and mutated PCR, was carried out to obtain the mutant PEA (ntPE), of the 553 amino acid codon of the PEA gene to produce the non-toxic PEA mutation gene. The ntPE-M2e chimeric gene was produced by replacing the non-essential region Ib, of the ntPE gene with the synthetic M2e coding region. The chimeric gene was introduced into pET expression vector to construct prokaryotic expression vector. BALB/c mice were immunized subcutaneously with Freund's incomplete adjuvant. Two weeks later, 5 LD50 influenza virus A/PR/34/8 strains were used to attack. The results of ELISA and spleen ELISPOT test showed that the immunized group could induce anti-M2e specific antibody reaction and cellular immune reaction and inhibit the replication of virus in the lung. This study laid a foundation for further research and development of influenza A virus wide-spectrum vaccine.
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所病毒基因工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家流感中心;
【基金】：傳染病防治科技重大專項(xiàng)(編號(hào):2009ZX10004-710)
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2320637