【摘要】： 目的:探討卡介苗(BCG)免疫小鼠T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+CD8+(雙陽,DP)T細胞及其內(nèi)穿孔素(PFN)的表達及意義。 方法:1.實驗動物分組:按體重相近的原則將30只清潔級KM雌性小鼠隨機分成2組,每組15只:①卡介苗免疫組(BCG組);②卡介苗免疫成功后致病量結(jié)核桿菌攻擊組(BCG-TB組).2.取血:實驗開始時第①、②組每只小鼠給予BCG 0.3ml(相當(dāng)于濕菌0.1 mg/只)皮下注射;第3個月后第②組每只小鼠均給予1ml TB混懸液(細菌數(shù)109)經(jīng)尾靜脈內(nèi)注射,同時,對照組①組注入相同體積的生理鹽水作對照。飼養(yǎng)1個月后兩組每只小鼠均經(jīng)內(nèi)眥靜脈取血1.5-2ml,分別檢測外周血中T細胞亞群及其內(nèi)穿孔素的表達。3.檢測:以CD3PerCP、CD4FTTC、CD8APC單抗標記T細胞亞群,以PE標記PFN,以流式細胞儀檢測分析總的淋巴細胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ CD8+(DP)T淋巴細胞計數(shù)和各亞群占淋巴細胞百分率及觀察各T細胞亞群內(nèi)表達PFN陽性細胞計數(shù)和各自占淋巴細胞百分率。4.肺組織病理學(xué)和細菌學(xué)檢查。 結(jié)果: 1.小鼠獲得卡介苗免疫成功后,受到致病量結(jié)核菌攻擊時不發(fā)病. 2.BCG-TB組小鼠CD3+、CD8+、CD8+%、DP T細胞計數(shù)高于BCG組(P0.05),CD4+ / CD8+低于BCG組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.兩組小鼠T細胞亞群均能表達PFN. 4.BCG-TB組小鼠表達PFN的CD3+、CD8+、DP T細胞計數(shù)高于BCG組(P0.05),CD4+ / CD8+低于BCG組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 5.BCG-TB組小鼠肝脾肺組織切片未見結(jié)核病灶,抗酸染色未見結(jié)核桿菌。 結(jié)論: (1)BCG免疫可提高宿主抵抗結(jié)核病的免疫力,增強抗結(jié)核保護性免疫表現(xiàn)為CD8+T、DP T細胞升高及T細胞內(nèi)PFN表達的升高.(2)CD8+T、DP T細胞是抗結(jié)核保護性免疫相關(guān)細胞.(3)PFN表達升高是機體抗結(jié)核保護性免疫表現(xiàn)之一。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression and significance of CD3, CD4, CD8 and CD4 CD8 (double positive, DP) T cells) and perforin (PFN) (PFN) in T lymphocyte subsets of mice immunized with BCG (BCG). Methods: 1. According to the principle of similar body weight, 30 clean KM female mice were randomly divided into 2 groups, 15 in each group: 1 BCG immunization group (BCG group); 2 the pathogenic amount of Mycobacterium tuberculosis after the successful immunization of BCG vaccine (BCG-TB group). 2. Blood collection: at the beginning of the experiment, each mouse in group 1 was injected with BCG 0.3ml (equivalent to 0.1 mg/ of wet bacteria) subcutaneously. After 3 months, each mouse in group 2 was injected with 1ml TB suspension (bacterial number 109) via caudal vein, and the control group 1 was injected with the same volume of normal saline as control group. After feeding for 1 month, the blood samples of each group were collected from the inner canthus vein to detect the expression of T cell subsets and perforin in peripheral blood. Detection: T-cell subsets were labeled with CD3PerCP,CD4FTTC,CD8APC monoclonal antibody and PFN, with PE. Total lymphocytes, CD3, CD4, CD8 were detected by flow cytometry. CD4 CD8 (DP) T lymphocyte count and the percentage of each subgroup in lymphocytes were observed. The expression of PFN positive cells in each T cell subgroup and the percentage of PFN positive cells in each T cell subgroup were observed. 4. Lung histopathology and bacteriological examination. Results: 1. After BCG was successfully immunized, the mice did not develop the disease when attacked by the pathogenic amount of tuberculous bacilli. The cell counts of CD3, CD8, CD8%, DP T in 2.BCG-TB group were higher than those in BCG group (P0.05), CD4 / CD8 was lower than BCG group (P0.05), the difference was statistically significant. 3. T-cell subsets in both groups expressed PFN. The number of CD3 and CD8, DP T cells expressing PFN in 4.BCG-TB group was higher than that in BCG group (P0.05), CD4 / CD8 was lower than BCG group (P0.05), the difference was statistically significant. In 5.BCG-TB group, no tuberculosis foci were found in liver, spleen and lung sections, and no mycobacterium tuberculosis was found in acid-fast staining. Conclusion: (1) BCG immunization can enhance the immunity of host against tuberculosis, and enhance the protective immunity of anti-tuberculosis. The expression of CD8 TDP T cells and the expression of PFN in T cells are increased. (2) the expression of PFN in T cells is increased. DP T cells are associated with antituberculous protective immunity. (3) the increase of PFN expression is one of the features of anti-tuberculosis protective immunity.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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本文編號：2318710