【摘要】：本論文主要包括兩方面的內(nèi)容：奇異變形桿菌鞭毛蛋白質(zhì)FliD和人染色體移動復(fù)合物的初步晶體學(xué)研究。 鞭毛是細菌的重要組成部分，同時也參與致病菌與宿主間的相互作用。細菌鞭毛的組裝與調(diào)控是由多種蛋白質(zhì)相互協(xié)調(diào)的一個復(fù)雜過程。然而鞭毛的數(shù)量及其長度與鞭毛帽子蛋白質(zhì)FliD有著密切的關(guān)聯(lián)，但是對于鞭毛的組裝機制并不清楚。本研究通過克隆、表達及純化的方法在體外表達純化了大量的奇異變形桿菌鞭毛帽子蛋白質(zhì)FliD；并得到了蛋白質(zhì)的晶體，通過限制性蛋白酶水解實驗及脫水等方法使得其衍射能力從無到3.5；同時也構(gòu)建了FliD與分子伴侶FliT的復(fù)合物，晶體學(xué)研究正在進行中。 染色體移動復(fù)合物（Chromosomal Passenger Complex, CPC)由蛋白激酶Aurora B、內(nèi)層著絲粒蛋白、存活蛋白及蛋白Borealin四部分組成，在細胞有絲分裂和減數(shù)分裂的各個階段CPC定位于相應(yīng)的位置發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)功能。有研究表明Survivin、borealin和INCENP（1-58aa）組成的三元復(fù)合物在體外可以與H3T3ph結(jié)合，同時通過核磁共振波譜(NMR)驗證了Survivin可以單獨與H3T3ph結(jié)合，表明Survivin是H3T3ph的受體。本研究通過克隆、表達及純化的方法表達純化了一系列的子復(fù)合物，最終發(fā)現(xiàn)Survivin單獨表達時穩(wěn)定性不好，存在降解條帶；但是與Borealin(10-109aa)構(gòu)建復(fù)合物時降解條帶消失。最后選擇克隆、表達純化Survivin-Borealin（10-109aa）后與生物合成的H3T3ph在體外通過共結(jié)晶的方法得到了衍射能力較好的晶體。解析結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)有H3T3ph結(jié)合，，后續(xù)再繼續(xù)進行相關(guān)復(fù)合物的研究。
[Abstract]:This paper mainly includes two aspects: Proteus mirabilis flagellum protein FliD and the preliminary crystallographic study of human chromosome moving complex. Flagella is an important component of bacteria and also participates in the interaction between pathogenic bacteria and hosts. Bacterial flagellum assembly and regulation is a complex process coordinated by a variety of proteins. However, the amount and length of flagella are closely related to the protein FliD of flagella cap, but the mechanism of flagellum assembly is not clear. In this study, a large number of Proteus mirabilis flagella protein FliD; was expressed and purified in vitro by cloning, expression and purification, and the crystal of the protein was obtained. The diffraction ability of FliD was increased from zero to 3.5 by means of restriction protease hydrolysis and dehydration. The complex of FliD and molecular chaperone FliT was also constructed, and crystallographic studies were in progress. Chromosome moving complex (Chromosomal Passenger Complex, CPC) consists of four parts: protein kinase Aurora B, inner centromere protein, survival protein and protein Borealin, which play an important role in regulating the location of CPC in various stages of cell mitosis and meiosis. Some studies have shown that the ternary complexes composed of Survivin,borealin and INCENP (1-58aa) can bind to H3T3ph in vitro, and Survivin can bind to H3T3ph alone by NMR (NMR), indicating that Survivin is the receptor of H3T3ph. In this study, a series of subcomplexes were expressed and purified by cloning, expression and purification. Finally, it was found that the Survivin expressed alone had poor stability and degradation bands, but the degradation bands disappeared when it was constructed with Borealin (10-109aa). Finally, the crystal with good diffraction ability was obtained by cocrystallization of Survivin-Borealin (10-109aa) and biosynthetic H3T3ph in vitro. No H3T3ph binding was found in the analytical structure, and further studies on the related complexes were carried out.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411

【共引文獻】

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本文編號：2291064