【摘要】： 創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnificus)是嚴重危害水產(chǎn)動物的人獸致病菌。莢膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)是創(chuàng)傷弧菌重要的毒力因子和抗原成分,在創(chuàng)傷弧菌的致病過程中起重要作用,為了了解創(chuàng)傷弧菌CPS的免疫原性,本研究以鰻源創(chuàng)傷弧菌強毒株FJ03-X2為研究對象,提取純化了創(chuàng)傷弧菌CPS,并對其成分、分子量,毒力和免疫原性進行了分析。 紫外吸收分光光度法測定CPS樣品,其主要峰值在200nm,基本符合多糖吸收峰的特征;SDS-PAGE的雙氨銀染圖譜未見明顯的蛋白質(zhì)和脂多糖條帶;瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示CPS樣品含少量核酸成分。結(jié)果表明提取得到較純的CPS。 通過SDS-PAGE和阿爾新藍-雙氨銀染法分析CPS,結(jié)果表明,CPS的相對分子量分布范圍為311～20 KDa;CPS可分為高分子量成分和低分子量成分;高分子量成分僅用阿爾新藍染色即可在凝膠上清晰顯示,呈現(xiàn)為連續(xù)的彌散狀區(qū)帶,其含量較高,相對分子量范圍為311～43 KDa;低分子量成分則需阿爾新藍-雙氨銀染法染色才能在凝膠上顯示,其含量較低,相對分子量范圍為43～20 KDa。 用CPS經(jīng)腹腔注射免疫昆明鼠,通過菌體凝集反應(yīng)、ELISA和Dot ELISA等方法分析CPS對鼠的免疫原性,結(jié)果顯示,鼠抗CPS血清可和一定濃度的創(chuàng)傷弧菌菌株FJ03-X2菌液發(fā)生凝集反應(yīng),凝集效價為2~(4～5);ELISA結(jié)果表明鼠抗CPS血清的抗體效價可達1∶12 800。初步說明,鰻源創(chuàng)傷弧菌菌株FJ03-X2的CPS對小鼠具有免疫原性,能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫應(yīng)答。 毒力試驗表明,CPS對歐鰻無直接致病力。CPS經(jīng)腹腔注射免疫接種歐鰻,Dot ELISA結(jié)果顯示,CPS不能激發(fā)試驗歐鰻產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答;免疫保護試驗表明,CPS不能誘導(dǎo)試驗歐鰻產(chǎn)生保護性免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Vibrio vulnificus (Vibrio vulnificus) is a human animal pathogen that seriously endangers aquatic animals. Capsule polysaccharide (Capsular polysaccharide,CPS) is an important virulence factor and antigenic component of Vibrio vulnificus, which plays an important role in the pathogenesis of Vibrio vulnificus. In order to understand the immunogenicity of Vibrio vulnificus CPS, a virulent strain FJ03-X2 from Vibrio vulgaris was studied in this study. CPS, was extracted and purified from Vibrio vulnificus and its components, molecular weight, virulence and immunogenicity were analyzed. UV absorption spectrophotometry showed that the main peak value of CPS was 200 nm, which basically accorded with the characteristics of polysaccharide absorption peak, and no obvious protein and lipopolysaccharide bands were found in the silver staining spectrum of SDS-PAGE. Agarose gel electrophoresis showed that CPS samples contained a small amount of nucleic acids. The results showed that pure CPS. was obtained by extraction. The results of CPS, analysis by SDS-PAGE and Alxinole-bisamino-silver staining showed that the relative molecular weight distribution range of CPS was 31120 KDa;CPS, which could be divided into high molecular weight component and low molecular weight component. The high molecular weight components can be clearly displayed on the gel by Alxin blue staining, showing a continuous dispersion zone, and the content of the high molecular weight components is relatively high. The relative molecular weight of the low molecular weight components in the range of 311C 43 KDa; required Albumin blue-diamino silver staining to show a lower content on the gel, with a relative molecular weight range of 43 ~ 20 KDa.. Kunming mice were immunized by intraperitoneal injection of CPS. The immunogenicity of CPS to mice was analyzed by cell agglutination reaction, ELISA and Dot ELISA. The results showed that the anti-CPS serum of mice could agglutinate with FJ03-X2 of a certain concentration of Vibrio vulnificus strain. The agglutination titer was 2 ~ (4); ELISA. The results showed that the antibody titer of mouse anti CPS serum could reach 1:12 800. The preliminary results showed that the CPS of Vibrio vulnificus strain FJ03-X2 had immunogenicity to mice and could induce specific humoral immune response in mice. The virulence test showed that CPS had no direct pathogenicity to eel. CPS was inoculated intraperitoneally with eel, Dot ELISA. The results showed that CPS could not stimulate humoral immune response of eel. Immune protection test showed that CPS could not induce protective immune response in eel.
【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：2289507