【摘要】： 第一部分:PBMC中肺炎衣原體的分離、培養(yǎng)及傳代 目的:從外周血單個(gè)核細(xì)胞中分離肺炎衣原體,進(jìn)行培養(yǎng)、傳代、擴(kuò)增。 方法:分離PBMC,用37%PEG使肺炎衣原體陽性的PBMC裂解釋放出肺炎衣原體,然后與Hep-2細(xì)胞一起離心,繼續(xù)培養(yǎng)Hep-2細(xì)胞。再將Hep-2細(xì)胞凍融破碎后,放入到新的Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行離心,以完成肺炎衣原體的一次傳代,然后以同樣的方法進(jìn)行二次傳代。用MIF及PCR法檢測(cè)Hep-2細(xì)胞中的肺炎衣原體抗原。結(jié)果:MIF法檢測(cè)肺炎衣原體感染后的Hep-2細(xì)胞,其胞內(nèi)肺炎衣原體抗原陽性MIF法檢測(cè)一次傳代及二次傳代的Hep-2細(xì)胞,其胞內(nèi)肺炎衣原體抗原均陽性;PCR法檢測(cè)肺炎衣原體DNA陽性。結(jié)論:該方法可以實(shí)現(xiàn)PBMC中肺炎衣原體的分離,并實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的培養(yǎng)及傳代。 第二部分自制肺炎衣原體抗原的應(yīng)用評(píng)估 目的:對(duì)自制Cpn-Ag檢測(cè)血清抗體進(jìn)行評(píng)估。方法:粗制Cpn-Ag,Dot-ELISA法觀察自制Cpn-Ag與進(jìn)口單抗的結(jié)合反應(yīng)。用自制Cpn-Ag和進(jìn)口Cpn-AR39-Ag通過微量免疫熒光法同時(shí)檢測(cè)血清標(biāo)本268例(Cpn-IgM、IgA、IgG)。結(jié)果:Dot-ELISA法結(jié)果顯示自制Cpn-Ag能與進(jìn)口單抗發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。自制Cpn-Ag與進(jìn)口Cpn-AR39-Ag檢測(cè)血清中Cpn-IgA、IgG、IgM抗體滴度(見表2、4、6),兩抗原檢測(cè)一致率均達(dá)90%以上,以進(jìn)口AR39-Ag檢測(cè)為標(biāo)準(zhǔn),自制抗原檢測(cè)靈敏度、特異度均在90%以上。陽性似然比均大于10,在IgM陽性似然比高達(dá)30,陰性似然比均小于0.1。采用配對(duì)卡方檢驗(yàn),顯示P值均＞0.05,表明自制與進(jìn)口Cpn-Ag檢測(cè)血清IgA、IgG、IgM結(jié)果沒有差別。同時(shí)采用一致性檢驗(yàn),Kappa值＞0.75,認(rèn)為兩者具有高度一致性。兩抗原檢測(cè)陽性結(jié)果抗體滴度總體水平無差異。結(jié)論:自制Cpn-Ag檢測(cè)血清Cpn-IgA、IgG、IgM具有較高的靈敏度和特異度,與進(jìn)口AR-39-Ag檢測(cè)具有高度一致性,自制Cpn-Ag可能可以替代進(jìn)口Cpn-AR39-Ag用于血清樣本的檢測(cè),以診斷臨床Cpn感染。
[Abstract]:Part I: isolation, culture and passage of chlamydia pneumoniae from PBMC objective: to isolate, culture and amplify chlamydia pneumoniae from peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Methods: chlamydia pneumoniae was released from chlamydia pneumoniae positive PBMC by 37%PEG by PBMC, then centrifuged with Hep-2 cells to culture Hep-2 cells. After freezing and thawing Hep-2 cells were put into a new Hep-2 cell culture bottle for centrifugation to complete the first passage of Chlamydia pneumoniae and then to carry on the second passage in the same way. Chlamydia pneumoniae antigen in Hep-2 cells was detected by MIF and PCR. Results: the Hep-2 cells infected with Chlamydia pneumoniae were detected by MIF, and the primary and second passages of Hep-2 cells were detected by MIF method, and chlamydia pneumoniae DNA was detected by PCR method. Conclusion: this method can be used to isolate chlamydia pneumoniae from PBMC and further culture and subculture. The second part is the application evaluation of chlamydia pneumoniae antigen. Objective: to evaluate the detection of serum antibodies by self-made Cpn-Ag. Methods: the binding reaction of self-made Cpn-Ag with imported McAb was observed by crude Cpn-Ag,Dot-ELISA method. A total of 268 serum samples (Cpn-IgM,IgA,IgG) were simultaneously detected by self-made Cpn-Ag and imported Cpn-AR39-Ag by micro-immunofluorescence assay. Results: the results of Dot-ELISA showed that self-made Cpn-Ag could react with imported McAbs. The titer of Cpn-IgA,IgG,IgM antibody in serum was detected by self-made Cpn-Ag and imported Cpn-AR39-Ag (see Table 2 / 4). The detection consistency rate of the two antigens was more than 90%. The sensitivity and specificity of self-made antigen detection were above 90% according to the standard of imported AR39-Ag detection. The positive likelihood ratio was more than 10, the positive likelihood ratio was 30 in IgM, and the negative likelihood ratio was less than 0.1. The results of paired chi-square test showed that P values were all more than 0.05, which indicated that there was no difference between self-made and imported Cpn-Ag in the detection of serum IgA,IgG,IgM. At the same time, the consistency test, Kappa value > 0. 75, think they have a high consistency. There was no difference in the titer of antibody between the two antigens. Conclusion: the detection of serum Cpn-IgA,IgG,IgM by self-made Cpn-Ag has high sensitivity and specificity, which is consistent with the detection of imported AR-39-Ag. Self-made Cpn-Ag may replace imported Cpn-AR39-Ag for detection of serum samples in order to diagnose clinical Cpn infection.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R374

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2279456