【摘要】：目前,國際上已將旋毛蟲屬分為8個(gè)種,即旋毛蟲(Trichinella spiralis,T1)、鄉(xiāng)土旋毛蟲(T.native,T2)、布氏旋毛蟲(T.britovi,T3)、偽旋毛蟲(T.pseudospiralis,T4)、米氏旋毛蟲(T.murrelli,T5)、納氏旋毛蟲(T.nelsoni,T7)、巴布亞旋毛蟲(T.papuae,T10)、津巴布韋旋毛蟲(T.zimbabwensis,T11)以及3個(gè)分類地位尚未確定的基因型(genotype)即Trichinella T6、T8和T9。其中偽旋毛蟲、巴布亞旋毛蟲和津巴布韋旋毛蟲為無囊包的旋毛蟲。由于不同種旋毛蟲的地理分布、宿主范圍、對(duì)宿主的致病性及宿主對(duì)不同蟲種的免疫應(yīng)答等方面存在有明顯差異,故旋毛蟲抗原的研究對(duì)旋毛蟲病的發(fā)病機(jī)理、免疫診斷及免疫預(yù)防等均具有重要意義。 為了觀察旋毛蟲和偽旋毛蟲抗原的差異,本文應(yīng)用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和雙向電泳技術(shù)(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)對(duì)旋毛蟲和偽旋毛蟲肌幼蟲的蟲體可溶性抗原(soluble antigen,Sag)及排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原進(jìn)行了分析。 材料與方法 1.旋毛蟲種與感染動(dòng)物本實(shí)驗(yàn)所用的旋毛蟲蟲種為旋毛蟲(T1)和偽旋毛蟲(T4),均引自國際旋毛蟲參考中心,由本教研室昆明小鼠傳代保種。4周齡健康雄性SD大鼠購自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將不同旋毛蟲蟲種感染SD大鼠后8周處死,全身肌肉人工消化后收集純凈的肌幼蟲。 2.肌幼蟲可溶性抗原與ES抗原的制備將人工消化后收集純凈的旋毛蟲肌幼蟲加入組織裂解液,放入勻漿器中在冰浴上研磨約1～2h,隨后在超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)破碎,離心收集上清。將純凈的旋毛蟲肌幼蟲置于含有1640培養(yǎng)基(不含血清)的培養(yǎng)皿中,在5%CO_2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20～24h,收集上清,透析和冷凍干燥后得到純化ES抗原。Bradford方法測(cè)蛋白濃度后,分裝,—80℃保存。 3.十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將制備好的T1、T4肌幼蟲可溶性抗原和ES抗原進(jìn)行SDS-PAGE,染色后觀察不同分子量的電泳條帶,然后用GeneGenius凝膠圖像分析儀獲得圖像并加以分析,尋找T1和T4的差異蛋白帶。 4.雙向電泳(2-DE)應(yīng)用等電聚焦(IEF)電泳和SDS-PAGE將T1、T4肌幼蟲可溶性抗原和ES抗原的蛋白分離,每種樣品重復(fù)3次,染色后得到蛋白雙向電泳圖譜,應(yīng)用PowerLook 1120型圖像掃描儀(分辨率為300bpi,像素8bits)獲得凝膠圖像,經(jīng)ImageMaster 2D Platinum 6.0凝膠圖像分析軟件進(jìn)行圖像調(diào)整、點(diǎn)檢測(cè)、點(diǎn)匹配、數(shù)據(jù)分析后,找出差異蛋白點(diǎn)。 結(jié)果 1.T1、T4肌幼蟲可溶性抗原的SDS-PAGE結(jié)果通過SDS-PAGE分析,發(fā)現(xiàn)T1肌幼蟲可溶性抗原蛋白有22條帶(221.62 kDa～14.88 kDa),其中主帶5條(115.19、65.56、53.93、29.08、14.88 kDa)的蛋白量占可溶性抗原蛋白總量的47.4%。T4肌幼蟲可溶性抗原蛋白有18條帶(185.28 kDa～14.27 kDa),其中主帶7條(119.30、68.56、56.1、48.50、40.74、28.36、14.27 kDa)的蛋白量占可溶性蛋白總量的66.7%。T1肌幼蟲可溶性抗原具有6條特異的蛋白帶(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34 kDa),而T4肌幼蟲可溶性抗原具有4條特異的蛋白帶(132.60、119.30、35.26、31.02 kDa)。 2.T1、T4肌幼蟲ES抗原的SDS-PAGE結(jié)果通過SDS-PAGE分析,發(fā)現(xiàn)T1肌幼蟲ES抗原具有10條蛋白帶(113.21 kDa～14.37 kDa),其中4條主帶(55.65、50.41、43.61、14.37 kDa)的蛋白量占ES抗原蛋白總量的85.7%。T4肌幼蟲ES抗原9條蛋白帶(104.71kDa～14.51 kDa),其中4條主帶(54.58、36.80、21.70、14.51 kDa)的蛋白量占ES抗原蛋白總量的81.3%。T1、T4肌幼蟲ES抗原的蛋白帶均不相同。 3.T1、T4肌幼蟲可溶性抗原、ES抗原的SDS-PAGE結(jié)果比較T1肌幼蟲可溶性抗原的8條蛋白帶(115.19、53.94、48.97、44.37、29.08、22.36、19.27、14.88 kDa)與ES抗原的8條蛋白帶(113.21、55.65、50.41、43.61、31.42、22.21、19.67、14.37 kDa)分子量相近。T4肌幼蟲可溶性抗原的5條蛋白帶(56.11、35.26、28.36、20.65、14.27 kDa)與ES抗原的5條蛋白帶(54.58、36.80、28.91、21.70、14.51 kDa)分子量相近。 4.T1、T4肌幼蟲可溶性抗原的雙向電泳結(jié)果T1肌幼蟲可溶性抗原具有193±12個(gè)蛋白點(diǎn),匹配點(diǎn)數(shù)為150個(gè),匹配率為81%,分子量主要為11～22 kDa、25～64 kDa及100～144 kDa,所對(duì)應(yīng)的等電點(diǎn)(isoelectric point,pI)分別為4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4肌幼蟲可溶性抗原具有175±9個(gè)蛋白點(diǎn),匹配點(diǎn)數(shù)為141個(gè),匹配率為82%,分子量主要為12～21 kDa及25～90 kDa,所對(duì)應(yīng)的pI分別為4～9.5及4.5～9.6。 5.T1、T4肌幼蟲ES抗原的雙向電泳結(jié)果T1肌幼蟲ES抗原具有82±6個(gè)蛋白點(diǎn),匹配點(diǎn)數(shù)為74個(gè),匹配率為84%,分子量主要為13～16 kDa、18～22 kDa及40～55 kDa,所對(duì)應(yīng)的p1分別為4～7、3.8～6.2及5～9;T4肌幼蟲ES抗原69±5個(gè)蛋白點(diǎn),匹配點(diǎn)數(shù)為57個(gè),匹配率為80%,分子量主要為10～15 kDa、17～25 kDa及29～55 kDa,所對(duì)應(yīng)的pI分別為4.7～6.5、4.6～6及5～7。 結(jié)論 1.旋毛蟲與偽旋毛蟲肌幼蟲可溶性抗原蛋白組份均多于其ES抗原。 2.旋毛蟲肌幼蟲可溶性抗原及ES抗原的蛋白組份與偽旋毛蟲的均不相同。旋毛蟲肌幼蟲可溶性抗原及ES抗原的蛋白組份均比偽旋毛蟲的復(fù)雜。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳主初;腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展[J];癌癥;2004年02期

2 李燎，，雷莉，馮瑞元，閻和平;旋毛蟲肌肉期幼蟲分泌排泄物中特異性抗原的分析[J];地方病通報(bào);1996年03期

3 蔡靜;;蛋白質(zhì)丙酮沉淀對(duì)2-DE圖譜的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

4 崔晶;旋毛蟲幼蟲囊包的結(jié)構(gòu)及其形成機(jī)制[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));2002年05期

5 崔晶,王中全;國外旋毛蟲病的流行現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));2005年05期

6 胡莉萍,沈巖;雙向凝膠電泳技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)與基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年02期

7 王中全;崔晶;晉雪香;;旋毛蟲幼蟲收集方法的探討[J];河南醫(yī)學(xué)研究;1993年01期

8 崔晶，王中全，晉雪香，武峰，毛福榮;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)人體旋毛蟲病診斷及療效考核價(jià)值的研究[J];河南醫(yī)學(xué)研究;1996年01期

9 苑淑賢;任科研;楊金生;董冬梅;姚新華;;旋毛蟲排泄-分泌抗原的制備及在免疫學(xué)診斷中的應(yīng)用研究[J];農(nóng)業(yè)與技術(shù);2006年04期

10 何東茍;蛋白質(zhì)組學(xué)研究及其在寄生蟲學(xué)上的應(yīng)用[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2003年04期

本文編號(hào)：2275463