【摘要】：目的：了解天津市耐藥結(jié)核病的流行現(xiàn)狀及其危險(xiǎn)因素,北京基因型結(jié)核分枝桿菌在人群中的流行現(xiàn)狀及其在耐藥結(jié)核病傳播中的作用,揭示天津地區(qū)耐藥結(jié)核分枝桿菌四種一線抗結(jié)核藥物耐藥相關(guān)基因的突變類型、突變頻率及其與耐藥表型和北京基因型的關(guān)系,結(jié)核分枝桿菌藥物外排泵基因的表達(dá)與耐藥表型、耐藥相關(guān)基因突變型的關(guān)系。 對(duì)象和方法： 1.耐藥結(jié)核病流行情況：研究對(duì)象為2008年1月至2009年6月,在天津市結(jié)核病控制中心、天津市10個(gè)區(qū)縣結(jié)防機(jī)構(gòu)就診的結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)陽性肺結(jié)核患者。采用“世界衛(wèi)生組織/國際防癆與肺部疾病聯(lián)合會(huì)”推薦的比例法,對(duì)研究對(duì)象初次分離培養(yǎng)獲得的菌株進(jìn)行利福平、異煙肼、鏈霉素和乙胺丁醇的藥物敏感實(shí)驗(yàn)。運(yùn)用橫斷面調(diào)查的方法描述耐藥結(jié)核病的流行情況。 2耐藥結(jié)核病危險(xiǎn)因素分析：對(duì)以上研究對(duì)象,采用單因素非條件和多因素非條件logistic回歸分析從社會(huì)人口學(xué)、菌株相關(guān)實(shí)驗(yàn)室信息、臨床信息和結(jié)核病管理信息四個(gè)方面分析耐多藥結(jié)核病和其他耐藥結(jié)核病的危險(xiǎn)因素。 3北京基因型菌株的流行情況：對(duì)從以上研究對(duì)象初次分離的結(jié)核分枝桿菌菌株,采用多重PCR方法鑒定北京基因型菌株,并分析北京基因型菌株的分布特征及其與耐藥表型的關(guān)系。 4耐藥相關(guān)基因突變的研究：對(duì)從以上研究對(duì)象初次分離的全部耐藥結(jié)核分枝桿菌菌株采用直接測(cè)序法檢測(cè)以下耐藥相關(guān)基因的突變情況并分析耐藥相關(guān)基因突變型與耐藥表型和北京基因型的關(guān)系：異煙肼耐藥株：katG、inhA、 oxyR-ahpC、ndh;利福平耐藥株：rpoB;鏈霉素耐藥株：rpsL和rrs;乙胺丁醇耐藥株：embB、embC和embA。 5藥物外排泵表達(dá)量的研究：研究對(duì)象為2007年天津市結(jié)核病控制中心參比室?guī)齑娴?1株菌株。采用real-time RT-PCR方法檢測(cè)藥物外排泵基因Rv1258c、 Rv1410c、Rv2136c、Rv0783c和Rv1819c的表達(dá)與耐藥表型、耐藥相關(guān)基因突變型的關(guān)系。 結(jié)果： 1.耐藥結(jié)核病流行現(xiàn)狀：共納入肺結(jié)核患者656例,其中初治568例,復(fù)治88例。藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果顯示：總耐藥率為26.98%(177/656),初治病人耐藥率為24.47%(139/568),復(fù)治病人耐藥率為43.18%(38/88)；總耐多藥率為6.25%(41/656),初治病人耐多藥率為3.70%(21/568),復(fù)治病人耐多藥率為22.73%(20/88)。 2耐藥結(jié)核病危險(xiǎn)因素分析：耐多藥結(jié)核病與以下因素有關(guān)：年齡組(30-49歲/≥50歲,OR=3.000,95%CI:1.121-8.024)、胸片受累肺野數(shù)(6個(gè)/1-5個(gè),OR=3.153,95%CI：1.187-8.378)、結(jié)核病治療史(復(fù)治/初治,OR=6.984,95%CI:3.250-15.009)和督導(dǎo)員(其他督導(dǎo)員/醫(yī)務(wù)人員,OR=2.935,95%CI：1.204-7.152)。未發(fā)現(xiàn)有關(guān)因素與其他耐藥結(jié)核病有關(guān)。 3北京基因型菌株的流行情況：分離到的656株結(jié)核分枝桿菌中,北京基因型菌株占91.46%(600/656),其分布與天津市戶籍(χ2=4.26,p=0.039)和年齡≥55歲(χ2=4.03,p=0.045)有關(guān),未發(fā)現(xiàn)北京基因型菌株的特殊耐藥型。 4耐藥相關(guān)基因突變的研究：異煙肼耐藥株katG突變率為49.09%(54/110),其中47株(42.73%)為katG315ACC(Thr), inhA-15C→T突變率為24.55%(27/110), oxyR-ahpC突變率為11.82%(13/110),未檢測(cè)到ndh突變,異煙肼耐藥株總突變率為85.45%(94/110),katG315位突變與異煙肼耐藥株同時(shí)對(duì)其他藥物耐藥有關(guān)。利福平耐藥株rpoB基因突變率為88.46%(46/52),以利福平耐藥決定區(qū)內(nèi)突變?yōu)橹?531、526和516位密碼子的突變率分別為50.00%(26/52)、23.08%(12/52)和5.77%(3/52),rpoB突變與利福平耐藥株聯(lián)合鏈霉素、鏈霉素和異煙肼有關(guān)。鏈霉素耐藥株rpsL突變率為73.27%(85/116),rrs突變率為14.66%(17/116),總突變率為87.07%(102/116),rpsL基因突變與北京基因型菌株有關(guān)。乙胺丁醇耐藥株embB基因突變率為27.27%(9/33),embC突變率為3.03%(1/33),未見embA突變。embB突變與多藥耐藥有關(guān)。 5.藥物外排泵基因表達(dá)量的研究：Rv1258c表達(dá)陰性。與全敏菌株相比,Rv1410c表達(dá)量在以下耐藥菌株中表達(dá)量升高：鏈霉素(t=2.18,p=0.034),異煙肼(t=2.20,p=0.032),異煙肼+鏈霉素(t=2.43,p=0.021),≥2種抗結(jié)核藥(F=3.60,p=0.018)；Rv2136c：異煙肼(t=2.03,p=0.047),耐多藥(t=2.22,p=0.037),異煙肼+鏈霉素(t=2.28,p=0.029)。Rv0783c的表達(dá)量：利福平耐藥株rpoB531位密碼子突變菌株高于該位點(diǎn)未突變的利福平耐藥株(t=2.84,p=0.016)。 結(jié)論： 1年齡在30-49歲、胸片受累6個(gè)肺野、結(jié)核病治療史、受非醫(yī)務(wù)人員及非家庭成員(其他督導(dǎo)員)督導(dǎo),是耐多藥結(jié)核病的危險(xiǎn)因素。因此在結(jié)核病防控工作中應(yīng)對(duì)肺結(jié)核病人群的此類特征加以關(guān)注并采取相應(yīng)措施。 2未發(fā)現(xiàn)北京基因菌株具有特殊的耐藥型。北京基因型菌株是天津市的主要流行株,在年齡≥55歲的人群中傳播較廣。 3耐藥相關(guān)基因突變是天津市結(jié)核分枝桿菌耐藥的主要分子機(jī)制,rpsL基因突變與北京基因型有關(guān)。本研究結(jié)果將為研發(fā)結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性檢測(cè)的新方法提供依據(jù)。 4Rv0783c的高表達(dá)與利福平耐藥株rpoB531位密碼子突變有關(guān)。Rv1410c和Rv2136c表達(dá)量可做為鑒定結(jié)核分枝桿菌多藥耐藥性的指標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378.911;R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2263291