【摘要】： 皰疹病毒對(duì)于人類是一種危害嚴(yán)重的病原體,其中以單純皰疹病毒(Herpessimplex virus,HSV)在人群中的感染最為普遍,HSV原發(fā)感染后,機(jī)體雖然能夠產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng),但并不能徹底消除病毒,病毒以潛伏感染的形式終生存在于宿主神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi),在一定狀態(tài)下可以被重新激活進(jìn)行裂解性增殖,從而損壞機(jī)體上皮組織。 單純皰疹病毒1型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)感染能導(dǎo)致一系列的細(xì)胞效應(yīng),尤其是宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成途徑在病毒侵入后出現(xiàn)明顯變化,例如:宿主細(xì)胞mRNA被選擇性或非特異性降解、mRNA轉(zhuǎn)錄被關(guān)閉、蛋白質(zhì)被選擇性地降解或保持穩(wěn)定,甚至重新定義細(xì)胞蛋白功能。 本課題借助比較蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)平臺(tái),將HSV-1病毒感染的人正常肝細(xì)胞L-02與未感染細(xì)胞分別進(jìn)行雙向電泳(2-DE),作蛋白質(zhì)組圖,鑒定表達(dá)差異較為顯著的蛋白點(diǎn)。在所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中,有一個(gè)為核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneousnuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2),在細(xì)胞中具有正性調(diào)控mRNA剪切和加工和轉(zhuǎn)運(yùn),當(dāng)被HSV-1感染后表現(xiàn)為表達(dá)量顯著下調(diào),這一結(jié)果提示:病毒通過影響細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控及關(guān)閉細(xì)胞蛋白質(zhì)等不同途徑實(shí)現(xiàn)病毒蛋白的合成。其中對(duì)剪接及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白合成的下調(diào),將直接導(dǎo)致pre-mRNA加工受阻。這對(duì)宿主細(xì)胞來說,意義顯得十分重要。在此基礎(chǔ)上,本課題通過Western blot,Northern blot等技術(shù)方法進(jìn)一步驗(yàn)證其在病毒復(fù)制過程中不同時(shí)段對(duì)其表達(dá)影響。初步探索hnRNP H2這一重要的mRNA剪切和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在HSV-1感染過程中與病毒蛋白之間的相互作用。NorthernBlot實(shí)驗(yàn)則提示,在病毒感染的不同時(shí)期hnRNP H2 mRNA的表達(dá)量有比較顯著的差異,隨著病毒感染的進(jìn)行,表達(dá)量顯著下降。與此同時(shí),Western blot與Northern Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合,即HSV-1感染L-02細(xì)胞4h、12h和24h后,檢測(cè)到hnRNP蛋白隨感染進(jìn)行其表達(dá)逐步下調(diào),在0-4h內(nèi)下降最為明顯,從而初步得出結(jié)論,可能是由于HSVⅠ的立早基因表達(dá)產(chǎn)物的參與,使hnRNP H2在病毒復(fù)制早期就開始顯著下調(diào)。 盡管上述細(xì)胞蛋白與病毒蛋白的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究,但本課題為探討病毒如何改變宿主蛋白合成途徑提供了很多新的線索。
[Abstract]:Herpes simplex virus (Herpessimplex virus,HSV) is one of the most harmful pathogens in human. After the primary infection of herpes simplex virus (Herpessimplex virus,HSV), the body can produce specific immune response, but it can not completely eliminate the virus. The virus exists in the host ganglion cells in the form of latent infection for life, and can be reactivated in a certain state for lytic proliferation, thus damaging the skin tissue of the body. Herpes simplex virus type 1 (Herpes simplex virus 1) HSV-1) infection can cause a series of cellular effects, especially the host cell protein synthesis pathway changes obviously after the virus invades. For example, the mRNA of host cells is selectively or nonspecifically degraded, the transcription of mRNA is shut down, the proteins are selectively degraded or maintained stable, and the function of cellular proteins is even redefined. In this study, two dimensional electrophoresis (2-DE) was performed on L-02 and uninfected human hepatocytes infected with HSV-1 virus to identify the protein spots with significant difference. One of the differential proteins was nuclear heterogeneousribonucleoprotein H2 (heterogeneousnuclear ribonucleoprotein H2hnRNP H2), which positively regulated the shearing, processing and transport of mRNA in cells, and showed a marked down-regulation of the expression level when infected with HSV-1. These results suggest that viral proteins are synthesized through different pathways, such as affecting cell transcription, regulating translation and shutting down cell proteins. The down-regulation of splicing and transporter synthesis will directly block the processing of pre-mRNA. This is very important to the host cells. On this basis, Western blot,Northern blot and other technical methods were used to further verify the effect of virus replication on its expression at different times. HnRNP H2, an important mRNA splicing and transporter, was preliminarily explored. The interaction between hnRNP H2 and viral proteins in the process of HSV-1 infection. Northern blot showed that there were significant differences in the expression of hnRNP H2 mRNA at different stages of viral infection. With the infection of the virus, the expression level decreased significantly. At the same time, the results of Western blot and Northern Blot assay were consistent, that is, after HSV-1 was infected with L-02 cells for 12 h and 24 h, the expression of hnRNP protein was gradually down-regulated with the infection, and the decrease was most obvious within 0-4 h, so the preliminary conclusion was drawn. It is possible that hnRNP H2 is down-regulated at the early stage of viral replication due to the involvement of HSV I gene expression products. Although the specific mechanism of cellular protein and viral protein remains to be further studied, this study provides many new clues on how the virus changes the host protein synthesis pathway.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2257662