發(fā)布時間：2018-10-08 09:58

【摘要】：目的以S-美芬妥英為探針藥,體外分析24種漢族人群CYP2C19新變異體的酶學(xué)活性。方法以野生型CYP2C19 c DNA為模板,通過定點誘變方法獲得24種CYP2C19新變異體和典型變異體CYP2C19.3的c DNA,利用Bac-toBac Baculovirus Expression System試劑盒,獲得高表達各型CYP2C19變異體的昆蟲微粒體。Western blot法進行CYP2C19蛋白定量。以S-美芬妥英為探針底物藥,體外測定不同藥物濃度下各型CYP2C19變異體的最大反應(yīng)速率Vmax和米氏常數(shù)Km,評價新突變類型對CYP2C19體外代謝活性的影響。結(jié)果利用昆蟲表達系統(tǒng),成功獲得高表達典型變異體CYP2C19.3和24種CYP2C19新變異體的昆蟲微粒體。Western blot結(jié)果顯示,變異體CYP2C19.3和35FS無正常CYP2C19酶的表達,與野生型相比,變異體CYP2C19.29和T130M表達量明顯下降,其余變異體蛋白表達量與野生型接近。體外代謝實驗結(jié)果顯示,變異體L16F針對S-美芬妥英的體外清除率(Vmax/Km)較野生型升高,T130M的活性與野生型相似,其余各突變型的清除率均低于野生型。其中,突變體CYP2C19.3、35FS和R124Q對于該底物藥無代謝活性。結(jié)論新發(fā)現(xiàn)的24種CYP2C19基因變異大多可引起酶體外藥代活性顯著降低,提示攜帶此類基因突變的個體服用經(jīng)由CYP2C19代謝藥物時,體內(nèi)藥物代謝速度可能會顯著變慢,臨床用藥時需密切關(guān)注。
[Abstract]:Objective to analyze the enzymatic activity of 24 new variants of CYP2C19 in vitro using S-mephenytoin as a probe. Methods using wild type CYP2C19 c DNA as template, the c DNA, of 24 new CYP2C19 variants and typical variants CYP2C19.3 were obtained by site-directed mutagenesis. Insect microsomes with high expression of various CYP2C19 variants were obtained. Western blot assay was used to quantify CYP2C19 protein. Using S-mephenytoin as the probe substrate, the maximum reaction rate (Vmax) and the Michlet constant (Km,) of various CYP2C19 variants at different drug concentrations were determined in vitro to evaluate the effect of new mutation types on the metabolic activity of CYP2C19 in vitro. Results using insect expression system, the insect microsomes with high expression of typical variant CYP2C19.3 and 24 new variants of CYP2C19 were successfully obtained. Western blot results showed that the mutant CYP2C19.3 and 35FS had no normal CYP2C19 enzyme expression, compared with wild type. The expression of CYP2C19.29 and T130M decreased significantly, and the other variants were similar to wild-type. The results of metabolism in vitro showed that the in vitro clearance rate (Vmax/Km) of variant L16F against S-mephenytoin was similar to that of wild type, and the clearance rate of other mutant types was lower than that of wild type. The mutants CYP2C19.3,35FS and R124Q had no metabolic activity against the substrate. Conclusion most of the 24 CYP2C19 gene mutations can cause the decrease of pharmacokinetic activity in vitro, which suggests that the drug metabolism may slow down significantly when the individuals with this mutation take the metabolic drugs via CYP2C19. Close attention should be paid to the clinical use of drugs.
【作者單位】： 衛(wèi)生部北京醫(yī)院檢驗科;衛(wèi)生部北京醫(yī)院 衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所;溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室;浙江省麗水市人民醫(yī)院臨床藥學(xué)實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31371280) 衛(wèi)生部行業(yè)科研專項經(jīng)費資助項目(201302008)
【分類號】：R394

【共引文獻】

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