【摘要】： 血吸蟲(chóng)病是世界上嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲(chóng)病之一,流行于世界上76個(gè)國(guó)家和地區(qū),目前有2億感染者。流行于我國(guó)的日本血吸蟲(chóng)病是所有血吸蟲(chóng)病中防治難度最大的一種。利用吡喹酮治療在控制該病的過(guò)程中起到重要作用,但治療后的反復(fù)感染,及反復(fù)化療可能產(chǎn)生抗藥性問(wèn)題,使得僅靠單一藥物治療無(wú)法從根本上控制血吸蟲(chóng)病的傳播。研發(fā)安全有效的抗血吸蟲(chóng)疫苗,單獨(dú)使用或結(jié)合化療將極大地推動(dòng)血吸蟲(chóng)病的防治工作。但早期研制的疫苗,從安全性或保護(hù)效果來(lái)看并不令人滿意。因此,新型抗原的鑒定和新型疫苗的研制是一項(xiàng)十分緊迫的任務(wù)。 本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法,從日本血吸蟲(chóng)的8個(gè)關(guān)鍵抗原中篩查18個(gè)表位,其中5個(gè)在日本血吸蟲(chóng)中鑒定,其余13個(gè)為曼氏血吸蟲(chóng)中鑒定的表位在日本血吸蟲(chóng)中的同源序列。利用表位改組技術(shù)成功構(gòu)建5個(gè)不同長(zhǎng)度的隨機(jī)串聯(lián)多表位人工抗原文庫(kù),并證明文庫(kù)具有良好的表位串聯(lián)多態(tài)性。 不同文庫(kù)免疫小鼠后抗體水平的檢測(cè),表明多表位基因的長(zhǎng)度對(duì)文庫(kù)的抗原性具有顯著的影響。保護(hù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5個(gè)文庫(kù)的保護(hù)效果并不理想,可能與所選的多數(shù)表位并未在日本血吸蟲(chóng)中得到有效證實(shí)有關(guān)。文庫(kù)L2取得部分的抗生殖作用,表明只有合適長(zhǎng)度的多表位基因文庫(kù)才有可能誘導(dǎo)較好的免疫保護(hù)作用。 通過(guò)上述工作,證實(shí)新型表位改組技術(shù)能應(yīng)用于不同病原體多表位文庫(kù)的構(gòu)建,確定可能誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)的多表位基因長(zhǎng)度;同時(shí)提示要構(gòu)建具有高保護(hù)性的日本血吸蟲(chóng)多表位人工抗原文庫(kù),仍有待于保護(hù)性表位的鑒定。 曼氏血吸蟲(chóng)表膜四次跨膜蛋白家族成員被認(rèn)為是具有保護(hù)潛力的抗原分子,其中是曼氏血吸蟲(chóng)新型抗原TSP-2更是獲得高達(dá)～60%的保護(hù)力,本研究對(duì)Sm-TSP-2在日本血吸蟲(chóng)中的同源分子展開(kāi)鑒定和評(píng)估。研究證實(shí)日本血吸蟲(chóng)Sj-TSP-2分子存在廣泛變異,根據(jù)C、D變異區(qū)不同,可分為七個(gè)亞類,同時(shí)存在不同亞類之間重組的雜合分子;三級(jí)結(jié)果預(yù)測(cè)顯示主要變異區(qū)暴露于分子的表面,表明此分子受正選擇作用,并提示其配體的多樣性;單一成蟲(chóng)RT-PCR顯示Sj-tsp-2亞類表達(dá)譜在個(gè)體成蟲(chóng)中存在極大的差異,以上研究結(jié)果提示Sj-stp-2可能參與日本血吸蟲(chóng)的免疫逃避。 半定量RT-PCR表明Sj-tsp-2基因在日本血吸蟲(chóng)尾蚴、童蟲(chóng)、雌雄成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵中都有不同水平的轉(zhuǎn)錄;但Western blot分析顯示Sj-TSP-2蛋白并不在蟲(chóng)卵期表達(dá)。免疫熒光定位實(shí)驗(yàn)表明Sj-TSP-2定位于肺期童蟲(chóng)的表膜,但在天然狀態(tài)下并不暴露;而活體成蟲(chóng)及冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)則證實(shí)Sj-TSP-2分子暴露于雌雄成蟲(chóng)的體表。 免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)顯示單一Sj-TSP-2亞類重組蛋白不能獲得任何的保護(hù)效果,所有亞類重組蛋白的混合物也只獲得較低的保護(hù)力,再次提示Sj-TSP-2分子與免疫逃避相關(guān),變異如此廣泛的Sj-TSP-2并不適合成為日本血吸蟲(chóng)的候選抗原。 以上工作顯示表膜蛋白TSP-2在曼氏血吸蟲(chóng)和日本血吸蟲(chóng)中極大的差異性,說(shuō)明曼氏血吸蟲(chóng)的保護(hù)性抗原,其在日本血吸蟲(chóng)中的同源分子并不一定同樣具有保護(hù)性;提示在不同環(huán)境壓力下,日本血吸蟲(chóng)可能采取了不同于曼氏血吸蟲(chóng)的免疫逃避策略,在一定程度上佐證了前一部分的結(jié)果,進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)日本血吸蟲(chóng)特異的保護(hù)性抗原和表位的鑒定對(duì)于日本血吸蟲(chóng)疫苗的研制的重要性。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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5 王s，

本文編號(hào)：2255490