【摘要】：篩選并分析間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞過程中GCN5招募促分化相關(guān)蛋白集合體的組成。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定MSCs經(jīng)5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-azaC)誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞;免疫共沉淀技術(shù)分離、串聯(lián)質(zhì)譜鑒定GCN5募集蛋白集合體組成,并從心肌細(xì)胞分化角度篩選、驗(yàn)證分化相關(guān)蛋白因子。MSCs經(jīng)5-azaC誘導(dǎo)分化的心肌樣細(xì)胞表達(dá)心肌特異性基因GATA4、MEF2C和心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能蛋白cTnt、MHC和Cx43;篩選、驗(yàn)證出心肌細(xì)胞分化相關(guān)GCN5招募蛋白歸類為:(1)DNA結(jié)合蛋白Sp1/KLF;(2)轉(zhuǎn)錄輔激活子PGC-1α和Rb1;(3)轉(zhuǎn)錄延伸復(fù)合體組成成分以及信號(hào)通路蛋白Akt。通過篩選獲得MSCs經(jīng)誘導(dǎo)向心肌樣細(xì)胞分化過程中心肌分化相關(guān)蛋白因子,為進(jìn)一步研究干細(xì)胞分化信號(hào)傳導(dǎo)途徑、特異性生物靶點(diǎn)干預(yù)以及提高干細(xì)胞分化效率打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To screen and analyze the composition of GCN5 recruitment associated protein aggregates for differentiation into cardiomyocyte-like cells induced by mesenchymal stem cells (mesenchymal stem cells,MSCs). Immunofluorescence cytochemistry and real-time fluorescence quantitative PCR were used to identify the differentiation of MSCs into cardiomyocyte-like cells induced by 5-azacytidine (5-azacytidine 5-azaC), co-immunoprecipitation technique, tandem mass spectrometry (MS) to identify the composition of GCN5 recruitment protein aggregates, and screening from the perspective of cardiomyocyte differentiation. To verify the expression of cardiomyocyte specific gene GATA4,MEF2C and cardiac myocyte structure by 5-azaC induced by differentiation related protein factor. The functional protein cTnt,MHC and Cx43; were screened. GCN5 recruitment proteins associated with cardiomyocyte differentiation were classified as: (1) DNA binding protein Sp1/KLF; (2) transcriptional coactivators PGC-1 偽 and Rb1; (3) transcription extension complex components and signal pathway protein Akt. Through screening, we obtained the related protein factor of myocardial differentiation in the process of MSCs induced cardiomyocyte differentiation, which laid a foundation for further study on the signal transduction pathway of stem cell differentiation, the intervention of specific biological target and the improvement of stem cell differentiation efficiency.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒科研究所;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30973219)~~
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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2 朱靜;馮川;李莉;鄧兵;田杰;張曉萍;;干擾組蛋白乙�；l(fā)間充質(zhì)干細(xì)胞心肌定向分化特定蛋白的異常表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年04期

3 朱靜;王應(yīng)雄;張曉萍;王金菊;張小飛;田杰;;Gcn5基因shRNA的載體構(gòu)建及其對干細(xì)胞分化中組蛋白乙酰化修飾的干擾作用[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2006年01期

【共引文獻(xiàn)】

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2 朱靜;馮川;李莉;鄧兵;田杰;張曉萍;;干擾組蛋白乙�；l(fā)間充質(zhì)干細(xì)胞心肌定向分化特定蛋白的異常表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年04期

3 張金平;趙靜;王慧娟;趙秀軍;趙春芳;張雷;;5-氮胞苷誘導(dǎo)外源表達(dá)Nkx2-5的P19細(xì)胞向心肌分化的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年18期

4 孫慧超;田杰;朱靜;呂鐵偉;陳國珍;李婭莎;;p300特異性siRNA載體的構(gòu)建及其對心肌細(xì)胞GATA4表達(dá)的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年11期

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6 魯榮;朱靜;田杰;劉官信;林建萍;劉建平;;Islet-1誘導(dǎo)C_3H_(10)T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化過程中對心肌特異蛋白基因上組蛋白乙酰化的促進(jìn)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年10期

7 李莉;朱靜;馮川;田杰;;GCN5特異性質(zhì)粒篩選及其對MSCs分化的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2008年06期

8 智深深;田杰;劉官信;魯榮;林建萍;劉建平;朱靜;;小鼠Islet-1基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)C_3H_(10)T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞特異性分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年07期

9 孫慧超;朱靜;呂鐵偉;吳曉云;黃國英;田杰;;姜黃素對小鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響及其表觀遺傳調(diào)控機(jī)制[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年09期

10 林建萍;田杰;劉官信;魯榮;劉建平;智深深;朱靜;;Islet-1在乙�；{(diào)控網(wǎng)絡(luò)中特異性輔助C3H10T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年04期

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2 馮川;SAHA促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化及其作用機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

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2 王琳軼;姜黃素干預(yù)酒精對心肌祖細(xì)胞H3K9高乙�；Ш饧盎虮磉_(dá)失衡[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 周娜;MSCs心肌樣細(xì)胞分化過程中GCN5募集促分化相關(guān)蛋白的篩選[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

4 孔娟娟;Islet-1在心臟發(fā)育的乙酰化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的樞紐作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

5 林建萍;Islet-1募集組蛋白乙酰化復(fù)合體促干細(xì)胞特化心肌樣細(xì)胞的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 魯榮;Islet-l促C_3H_（10）Tl/2向心肌樣細(xì)胞特化中基因上組蛋白乙�；饔眉跋嗷リP(guān)系研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 朱靜;鄧兵;王金菊;田杰;王應(yīng)雄;;5-aza誘導(dǎo)干細(xì)胞經(jīng)乙酰化特異RNAi后心肌細(xì)胞發(fā)育相關(guān)基因檢測[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

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3 黃百渠,曾慶華,畢曉輝,王玉紅,李玉新;組蛋白和核小體在基因轉(zhuǎn)錄中的作用[J];科學(xué)通報(bào);2000年19期

4 杜梅君,劉德培,梁植權(quán);RNA干擾與染色質(zhì)沉默——生物體內(nèi)精密的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2004年03期

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8 張文,田杰,江德勤,張蕾,朱靜,陳沅;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為心肌樣細(xì)胞相關(guān)調(diào)控基因的時(shí)序表達(dá)[J];中華心血管病雜志;2004年11期

9 朱靜;王應(yīng)雄;張曉萍;王金菊;張小飛;田杰;;Gcn5基因shRNA的載體構(gòu)建及其對干細(xì)胞分化中組蛋白乙酰化修飾的干擾作用[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2006年01期

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7 郭勇;張西正;郭春;魏嚴(yán);李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化中心肌發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2008年年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

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6 李紅;互聯(lián)網(wǎng)面臨第二次分化？[N];中國企業(yè)報(bào);2001年

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本文編號(hào)：2253125