【摘要】：篩選并分析間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)誘導分化為心肌樣細胞過程中GCN5招募促分化相關蛋白集合體的組成。免疫熒光細胞化學、實時熒光定量PCR鑒定MSCs經(jīng)5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-azaC)誘導分化為心肌樣細胞;免疫共沉淀技術分離、串聯(lián)質(zhì)譜鑒定GCN5募集蛋白集合體組成,并從心肌細胞分化角度篩選、驗證分化相關蛋白因子。MSCs經(jīng)5-azaC誘導分化的心肌樣細胞表達心肌特異性基因GATA4、MEF2C和心肌細胞結構、功能蛋白cTnt、MHC和Cx43;篩選、驗證出心肌細胞分化相關GCN5招募蛋白歸類為:(1)DNA結合蛋白Sp1/KLF;(2)轉(zhuǎn)錄輔激活子PGC-1α和Rb1;(3)轉(zhuǎn)錄延伸復合體組成成分以及信號通路蛋白Akt。通過篩選獲得MSCs經(jīng)誘導向心肌樣細胞分化過程中心肌分化相關蛋白因子,為進一步研究干細胞分化信號傳導途徑、特異性生物靶點干預以及提高干細胞分化效率打下了基礎。
[Abstract]:To screen and analyze the composition of GCN5 recruitment associated protein aggregates for differentiation into cardiomyocyte-like cells induced by mesenchymal stem cells (mesenchymal stem cells,MSCs). Immunofluorescence cytochemistry and real-time fluorescence quantitative PCR were used to identify the differentiation of MSCs into cardiomyocyte-like cells induced by 5-azacytidine (5-azacytidine 5-azaC), co-immunoprecipitation technique, tandem mass spectrometry (MS) to identify the composition of GCN5 recruitment protein aggregates, and screening from the perspective of cardiomyocyte differentiation. To verify the expression of cardiomyocyte specific gene GATA4,MEF2C and cardiac myocyte structure by 5-azaC induced by differentiation related protein factor. The functional protein cTnt,MHC and Cx43; were screened. GCN5 recruitment proteins associated with cardiomyocyte differentiation were classified as: (1) DNA binding protein Sp1/KLF; (2) transcriptional coactivators PGC-1 偽 and Rb1; (3) transcription extension complex components and signal pathway protein Akt. Through screening, we obtained the related protein factor of myocardial differentiation in the process of MSCs induced cardiomyocyte differentiation, which laid a foundation for further study on the signal transduction pathway of stem cell differentiation, the intervention of specific biological target and the improvement of stem cell differentiation efficiency.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院兒科研究所;重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.30973219)~~
【分類號】：R329

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：2253125