【摘要】： 目的:構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)濾液蛋白32(culture filtrate protein 32,CFP32)的重組質(zhì)粒,在大腸桿菌中表達(dá)并純化重組蛋白CFP32,探討其在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法:PCR擴(kuò)增CFP32基因片段,將其克隆到pET-21a表達(dá)載體。優(yōu)化表達(dá)條件,Ni-NTA親和層析方法純化重組CFP32蛋白。建立檢測(cè)CFP32抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法,并用于檢測(cè)160例臨床血清標(biāo)本中的CFP32抗體。 結(jié)果:克隆了cfp32基因,構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pET21a-cfp32,IPTG誘導(dǎo)在大腸桿菌中得到高表達(dá)CFP32蛋白包涵體,SDS-PAGE電泳在30 KD處得到條帶,純化得到高純度CFP32蛋白,PBS復(fù)性后測(cè)得蛋白含量為3.46 mg/mL。建立并優(yōu)化了CFP32檢測(cè)結(jié)核抗體的ELISA方法。97例臨床確診的肺結(jié)核患者中62例CFP32抗體陽(yáng)性,敏感性為63.9%;25例非結(jié)核病患者和38例健康人血清CFP32抗體陽(yáng)性2例,特異性為96.8%。 結(jié)論:成功在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)CFP32蛋白,血清抗體檢測(cè)表明重組的CFP32蛋白有希望成為結(jié)核病血清學(xué)診斷的有效候選蛋白之一。
[Abstract]:Objective: to construct the recombinant plasmid of mycobacterium tuberculosis culture filtrate protein 32 (culture filtrate protein 32 CFP32 and express and purify the recombinant protein CFP32, in Escherichia coli to explore its application value in tuberculosis serological diagnosis. Methods CFP32 gene fragment was amplified by PCR and cloned into pET-21a expression vector. Purification of recombinant CFP32 protein by Ni-NTA affinity chromatography. An enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was established to detect CFP32 antibodies in 160 clinical serum samples. Results: the cfp32 gene was cloned, and the expression plasmid pET21a-cfp32,IPTG was constructed to induce the inclusion body of high expression CFP32 protein in Escherichia coli. SDS-PAGE electrophoresis was carried out at 30 KD. After renaturation of CFP32 protein with high purity, the protein content was 3.46 mg/mL.. A ELISA method for detection of tuberculosis antibody by CFP32 was established and optimized. 62 cases were positive for CFP32 antibody. The sensitivity was 63.9% in 25 cases of non-tuberculosis and 38 cases in healthy persons. The specificity was 96.8%. Conclusion: CFP32 protein was successfully expressed in Escherichia coli. The detection of serum antibody showed that the recombinant CFP32 protein might be one of the effective candidate proteins for the serological diagnosis of tuberculosis.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R378;R446.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 王亮;胡建平;;結(jié)核分枝桿菌(H_(37)Rv)分泌性蛋白的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)方法[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

2 蔡宏,潘怡,朱玉賢,李國(guó)利,莊玉輝;結(jié)核分枝桿菌多價(jià)核酸疫苗的構(gòu)建及免疫原性[J];科學(xué)通報(bào);2002年13期

3 吳雪瓊,張俊仙,李洪敏,夏湘萱,劉軍,金關(guān)甫;結(jié)核分枝桿菌MPT64蛋白的表達(dá)、純化及初步應(yīng)用[J];中國(guó)防癆雜志;2001年02期

4 吳雪瓊,張俊仙,王安生,張妍,周文強(qiáng),鄭冬燕,何菊芳,張濤;結(jié)核分支桿菌Ag85A蛋白的克隆、表達(dá)及其血清學(xué)診斷價(jià)值的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年11期

5 吳雪瓊;;結(jié)核分枝桿菌保護(hù)性抗原的研究進(jìn)展[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2006年05期

6 潘毓萱;;對(duì)結(jié)核病血清學(xué)診斷研究中對(duì)照設(shè)置的一點(diǎn)看法[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2006年07期

7 馮雪鳴;張萍;;結(jié)核分枝桿菌特異性38kD多肽抗原提純及其血清學(xué)診斷價(jià)值的研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2007年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 柏銀蘭;結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白MPT64的表達(dá)、純化及免疫學(xué)特性的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

，

本文編號(hào)：2250458