【摘要】：目的初步評(píng)價(jià)腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)與乙型肝炎(簡(jiǎn)稱乙肝)病毒(hepatitis B,HBV)聯(lián)合疫苗中兩種抗原之間的相互作用及其免疫小鼠誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答水平。方法將EV71滅活疫苗抗原和重組HBV疫苗抗原(HBs Ag)按常規(guī)劑量,采用直接吸附法吸附Al(OH)3佐劑,配制成EV71-HBV聯(lián)合疫苗,并設(shè)單苗組、佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組(PBS),分別于0、28 d各經(jīng)腓腸肌免疫BALB/c小鼠1次,于初免后第2、4周和第2劑免疫后第2、4、8周經(jīng)尾動(dòng)脈采血,分離血清,采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清中Anti-HBs水平,微量中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中EV71中和抗體效價(jià);并于初免后第3、4周和第2劑免疫后第1、2、4周取小鼠脾臟,分離脾單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cell,MNC),采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)檢測(cè)MNC中抗原特異性IFNγ的分泌水平。結(jié)果第2劑免疫后第2周,各疫苗組小鼠血清EV71中和抗體和Anti-HBs陽(yáng)轉(zhuǎn)率均達(dá)100%,各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)疫苗組間抗體效價(jià)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組抗體均無(wú)陽(yáng)轉(zhuǎn)。各疫苗組分泌IFNγ的斑點(diǎn)形成細(xì)胞(spot forming cell,SFC)數(shù)在5個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)有所波動(dòng),第2劑免疫后第1周,所有疫苗組IFNγ分泌水平均明顯升高,達(dá)5個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的峰值,第2劑免疫后第2周顯著下降,但在第2劑免疫后第4周又小幅升高;除第2劑免疫后第2周EV71-HBV聯(lián)合疫苗組SFC數(shù)顯著高于EV71單苗組外(P0.05),其他檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)EV71-HBV聯(lián)合疫苗組與單苗組的SFC數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組的ELISPOT檢測(cè)結(jié)果均為陰性。結(jié)論一定劑量的EV71和HBV聯(lián)合疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生良好的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,兩種抗原間未發(fā)現(xiàn)相互作用。
[Abstract]:Objective to evaluate the interaction between the two antigens of enterovirus 71 (enterovirus 71) and hepatitis B virus (hepatitis) hepatitis B virus (HBV) combined vaccine and the level of specific immune response induced by immunization in mice. Methods EV71 inactivated vaccine antigen and recombinant HBV vaccine antigen (HBs Ag) were prepared by direct adsorption method to adsorb Al (OH) 3 adjuvant. The adjuvant control group and the blank control group were immunized with gastrocnemius muscle once on day 028, respectively. The blood samples were collected from caudal artery at the 4th week after the first immunization and the 2nd week after the 2nd dose immunization. The serum samples were isolated and the serum Anti-HBs levels were detected by double antibody sandwich ELISA method. The neutralization antibody titers of EV71 in serum were detected by microneutralization test, and the spleen of mice was collected at the 3rd week and 2nd week after immunization. Splenic mononuclear cells (mononuclear cell,MNC) were isolated and the levels of antigen-specific IFN 緯 in MNC were detected by enzyme linked immunoblot assay (enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT). Results at the second week after the second dose immunization, the serum EV71 neutralizing antibody and Anti-HBs positive conversion rate of each vaccine group were 100, and there was no significant difference in antibody titer between each test time point (P0.05), and there was no positive conversion between adjuvant control group and blank control group. The number of (spot forming cell,SFC of IFN 緯 secreted by dot-forming cells in each vaccine group fluctuated at 5 test time points, and the level of IFN 緯 secretion in all vaccine groups increased significantly at the first week after the second dose immunization, reaching the peak value at 5 test time points. At the 2nd week after the second dose immunization, it decreased significantly, but increased slightly at the 4th week after the second dose immunization. The number of SFC in EV71-HBV combined vaccine group was significantly higher than that in EV71 single vaccine group at the second week after immunization (P0.05), but there was no significant difference in SFC number between EV71-HBV combined vaccine group and single vaccine group at other time points (P0.05); the number of SFC in adjuvant control group and blank control group was significantly higher than that in control group (P0.05). The results of ELISPOT were negative. Conclusion A certain dose of EV71 and HBV combined vaccine can induce good humoral and cellular immune responses in mice. No interaction between the two antigens was found.
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所生物制品四室;
【基金】：國(guó)家十二五“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2015ZX09101-031)
【分類號(hào)】：R373.2;R392-33

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