【摘要】： 前言 NZB×NZW/F1小鼠是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)模型小鼠,我們的前期研究發(fā)現(xiàn)在NZW小鼠的第9號(hào)染色體有一SLE易感基因位點(diǎn)與IL-10RA基因連鎖,其IL-10RA基因編碼區(qū)序列有多處改變。G1066A密碼子改變導(dǎo)致編碼氨基酸由甘氨酸變?yōu)楣劝彼?造成承擔(dān)IL-10信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)向調(diào)節(jié)的酪氨酸激酶JAK1和TYK2磷酸化結(jié)合模序缺失,從而不能抑制細(xì)胞免疫和炎癥應(yīng)答,引起一系列病理免疫過程導(dǎo)致SLE發(fā)病。本實(shí)驗(yàn)通過研究NZW型IL-10R對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞生物功能及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響,從而闡明其在SLE發(fā)病過程中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法 本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的NZW型載體[pcDNA3.1(+)—NZW—IL-10R]和野生型載體[pcDNA3.1(+)—WILD—IL-10R]通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染到小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7,利用G418篩選高表達(dá)IL-10R的克隆,并通過流式細(xì)胞術(shù)確證。通過MTT法測(cè)定mIL-10刺激的高表達(dá)克隆增殖情況,免疫印跡方法檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)測(cè)定炎性細(xì)胞因子分泌。 研究結(jié)果 1、mIL-10不能抑制表達(dá)NZW型IL-10R的小鼠巨噬細(xì)胞增殖。 2、同樣mIL-10呈現(xiàn)劑量依賴性促進(jìn)NZW型IL-10R的RAW264.7細(xì)胞炎性細(xì)胞因子IL-1a,TNF-a分泌。 3、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白在NZW型巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為磷酸化程度降低。 結(jié)論 NZW型IL-10R由于其多處的基因編碼區(qū)域序列改變,尤其是JAK1和TYK2磷酸化結(jié)合模序的缺失,導(dǎo)致IL-10與其結(jié)合后不能在小鼠的單核巨噬細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制效應(yīng),從而不能限制炎癥應(yīng)答造成過度的炎癥損傷,因此可能在自身免疫性疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:NZB 脳 NZW/F1 mice are (SLE) model mice of systemic lupus erythematosus. Our previous study found that there is a SLE susceptibility gene locus to IL-10RA gene on chromosome 9 of NZW mice. There were several changes in the coding region of IL-10RA gene. G1066A codon change led to the change of encoding amino acid from glycine to glutamate, resulting in the deletion of tyrosine kinase JAK1 and TYK2 phosphorylation binding motif, which is responsible for the negative regulation of IL-10 signal transduction. So it can not inhibit cellular immunity and inflammatory response, causing a series of pathological immune process leading to the pathogenesis of SLE. The effect of NZW type IL-10R on the biological function and signal transduction of mouse macrophages was studied in order to elucidate its role in the pathogenesis of SLE. Methods NZW vector [pcDNA3.1 () -NZW-IL-10R] and wild-type vector [pcDNA3.1 () -WILD-IL-10R] constructed in our laboratory were transfected into mouse macrophage cell line RAW264.7, by liposome transfection. And confirmed by flow cytometry. The expression of signal transduction protein was detected by Western blot and the secretion of inflammatory cytokines was measured by real-time quantitative PCR. Results 1 mIL-10 could not inhibit the proliferation of murine macrophages expressing NZW type IL-10R. 2. Similarly, mIL-10 showed a dose-dependent increase in IL-1a,TNF-a secretion from RAW264.7 cells of NZW type IL-10R. 路3 the signal transduction protein showed decreased phosphorylation in NZW macrophages. Conclusion NZW type IL-10R can not play an immunosuppressive effect on mouse mononuclear macrophages due to the sequence changes of its multiple coding regions, especially the deletion of JAK1 and TYK2 phosphorylation binding motifs. Thus, the inflammatory response can not be limited to cause excessive inflammatory damage, so it may play an important role in the pathogenesis of autoimmune diseases.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392.2

【共引文獻(xiàn)】

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2 尹志華;葉志中;甘達(dá)強(qiáng);戴莉萍;汪迅;曾惠瓊;張志;;TNFR2基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年10期

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4 刁騁;;白細(xì)胞介素-10與系統(tǒng)性紅斑狼瘡[J];沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年02期

5 朱麗晶,劉志紅,陳朝紅,陳欣,余晨,吳義超,張?chǎng)?黎磊石;腎小球白介素-10基因表達(dá)的檢測(cè)及其在狼瘡性腎炎分子診斷中的應(yīng)用[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2003年05期

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2 吳元俊;白細(xì)胞介素-10在人類腎小球疾病腎組織中的表達(dá)及其對(duì)系膜細(xì)胞的作用和機(jī)制探討[D];南京醫(yī)科大學(xué);2002年

3 楊定華;vIL-10基因修飾造血干細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠心臟移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 劉煜德;邪毒內(nèi)侵與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性及清熱解毒法的干預(yù)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2005年

5 鐘淼;白細(xì)胞介素6生成抑制劑的藥理研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

6 王江東;細(xì)胞因子IL-10及TNF-α基因多態(tài)性及其血清水平與2型糖尿病發(fā)病機(jī)理的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

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2 杜冉;正常人白細(xì)胞介素10血清濃度、啟動(dòng)子區(qū)域基因多態(tài)性分析及其與血脂水平相關(guān)性研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 張婧;白介素10信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制對(duì)C57BL/6和MRL/1pr小鼠免疫效應(yīng)細(xì)胞功能及活性影響的比較[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

4 常曉萍;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者ER、IL-10、Blys的表達(dá)與臨床相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

5 王子娥;女性SLE患者雌激素受體α基因多態(tài)性與Th1/Th2細(xì)胞因子漂移的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2009年

6 萬(wàn)焰;兩種中藥方劑治療MRL/lpr狼瘡小鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

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本文編號(hào)：2224098