【摘要】： 活性氧物質(zhì)(ROS)是生物體內(nèi)氧的某些代謝產(chǎn)物和一些反應(yīng)的含氧產(chǎn)物的總稱,與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞分化、衰老等很多生理學(xué)現(xiàn)象密切相關(guān),一般被認(rèn)為是具有有害和有利雙重作用的。過度的氧化應(yīng)激將導(dǎo)致細(xì)胞的壞死,而適度的氧化應(yīng)激則誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。ROS處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡中是其行使正常功能所必須,其中超氧陰離子(O_2~-)是胞內(nèi)氧化壓力的重要來源,并能通過反應(yīng)轉(zhuǎn)化為其他各類ROS。 作為活性氧的一種清除劑,超氧化物歧化酶能夠催化超氧陰離子O2.-反應(yīng)生成H_2O_2和水,在降低胞內(nèi)O2.-水平和胞內(nèi)氧化壓力起到重要的作用,尤其是位于線粒體的Mn-SOD,是清除ROS第一道防線,幾乎任何癌的Mn-SOD都明顯低于正常,而且也有研究表明Mn-SOD可提高細(xì)胞對(duì)氧應(yīng)激反應(yīng)的耐受性。 在本研究中,我們通過轉(zhuǎn)染含有Mn-SOD的真核表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)入肝細(xì)胞HepG2,構(gòu)建出高M(jìn)n-SOD表達(dá)的肝細(xì)胞模型,證明Mn-SOD在雙氧水的刺激下對(duì)線粒體活性存在保護(hù)作用,具有較高M(jìn)n-SOD水平的細(xì)胞相對(duì)Mn-SOD缺乏的細(xì)胞而言具有對(duì)雙氧水的細(xì)胞毒性更好的抵抗作用。 此外,我們用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染Mn-SOD對(duì)細(xì)胞中ROS水平和細(xì)胞周期的影響,為了尋找Mn-SOD抗氧化作用的具體信號(hào)通路,我們用Western檢測(cè)了Akt的磷酸化的狀態(tài),用RT-PCR檢測(cè)了轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)顯示,Mn-SOD的高表達(dá)抑制Akt的磷酸化和降低氧化敏感轉(zhuǎn)錄因子c-Fos/c-Jun和p65的表達(dá)水平,這些結(jié)果表明Mn-SOD通過降低ROS水平,調(diào)節(jié)Akt的磷酸化從而抑制轉(zhuǎn)錄因子c-Fos/c-Jun and p65的表達(dá),終致抗氧化能力的提高。
[Abstract]:Reactive oxygen species (ROS) is a general term for some metabolites of oxygen and some reactive oxygen products in organisms, which are closely related to many physiological phenomena, such as apoptosis, cell cycle, signal transduction, cell differentiation, senescence and so on. It is generally considered to have both harmful and beneficial effects. Excessive oxidative stress leads to cell necrosis, while moderate oxidative stress induces cell proliferation. Ros in a dynamic balance is necessary for its normal function, and superoxide anion is an important source of intracellular oxidative pressure. And can be converted into other kinds of ROS. by reaction. As a scavenger of reactive oxygen species, superoxide dismutase can catalyze the reaction of superoxide anion O 2.- to produce H_2O_2 and water, which plays an important role in reducing the level of intracellular O 2-and the intracellular oxidation pressure. In particular, Mn-SOD, located in mitochondria is the first line of defense to clear ROS, Mn-SOD in almost any cancer is significantly lower than normal, and some studies have shown that Mn-SOD can improve the tolerance of cells to oxygen stress. In this study, we constructed a hepatocyte model with high Mn-SOD expression by transfection of eukaryotic expression plasmid containing Mn-SOD into hepatocyte HepG2, which proved that Mn-SOD has protective effect on mitochondrial activity induced by hydrogen peroxide. The cells with higher Mn-SOD level had better resistance to the cytotoxicity of hydrogen peroxide than those lacking Mn-SOD. In addition, we used flow cytometry to detect the effect of Mn-SOD transfection on ROS level and cell cycle. In order to find the specific signal pathway of Mn-SOD antioxidation, we used Western to detect the phosphorylation of Akt. The expression of transcription factors was detected by RT-PCR. The results showed that the high expression of Mn-SOD inhibited the phosphorylation of Akt and the expression of oxidative sensitive transcription factors c-Fos/c-Jun and p65. These results indicated that Mn-SOD inhibited the expression of c-Fos/c-Jun and p65 by decreasing the level of ROS and regulating the phosphorylation of Akt. The ultimate increase in antioxidant capacity.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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