【摘要】：研究目的： 探究激素刺激下,單核細(xì)胞所釋放的膜微粒和組織因子(TF)陽(yáng)性膜微粒的數(shù)量、促凝血功能。組織因子的表達(dá)和作用,以及激素對(duì)單核細(xì)胞內(nèi)組織因子表達(dá)的影響。內(nèi)毒素對(duì)單核細(xì)胞的作用是否能被激素促進(jìn)或者抑制。 研究方法： 選用人單核細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系THP-1為研究對(duì)象。用地塞米松0.1mM、0.01mM、0.001mM三種不同濃度分別刺激4h、12h、24h后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)上清液中組織因子陽(yáng)性膜微粒和總膜微粒的數(shù)量,以及TF陽(yáng)性膜微粒所占比例。用一期法凝血時(shí)間測(cè)定細(xì)胞上清液的促凝血活性。用CD14抗體捕獲膜微粒,測(cè)定膜微粒相關(guān)的組織因子活性。用熒光實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定細(xì)胞中組織因子的mRNA水平。研究結(jié)果： 除4h-0.001mM組外,激素刺激組釋放的TF陽(yáng)性膜微粒數(shù)量比基礎(chǔ)值高出1.5-3倍,總膜微粒高出基礎(chǔ)值1.3-2.5倍。地塞米松的劑量與TF陽(yáng)性膜微粒數(shù)量正相關(guān)(r=0.673,p0.001),與總膜微粒數(shù)量正相關(guān)(r=0.804,p=0.001)。激素對(duì)LPS刺激THP-1細(xì)胞釋放TF陽(yáng)性膜微粒沒(méi)有促進(jìn)作用。地塞米松刺激THP-1細(xì)胞后釋放的TF陽(yáng)性膜微粒表面的TF具有活性。 地塞米松刺激THP-1細(xì)胞的上清液的凝血時(shí)間比陰性對(duì)照縮短(p0.05),4h組和24h組的凝血時(shí)間與同一樣本的上清液中TF陽(yáng)性膜微粒數(shù)量負(fù)相關(guān)(4h r=-0.762p=0.028；12h r=-0.833p=0.010).地塞米松刺激4h時(shí)顯著減少了TF-mRNA的水平(p0.01),0.01mM濃度在12h和24h刺激時(shí)間能增加TF-mRNA (p0.01)。TF-mRNA水平與凝血時(shí)間沒(méi)有相關(guān)性。 結(jié)論： 地塞米松刺激THP-1細(xì)胞釋放高于基礎(chǔ)量的TF陽(yáng)性膜微粒,這些膜微粒具有TF活性,其數(shù)量與地塞米松劑量正相關(guān),與促凝血作用強(qiáng)度存在一定的相關(guān)性。地塞米松的這種作用不是來(lái)源于轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。
[Abstract]:Aim: to investigate the number of membrane particles and tissue factor (TF) positive membrane particles released by monocytes stimulated by hormones, and to investigate the coagulation function. The expression and function of tissue factor and the effect of hormone on the expression of tissue factor in monocytes. Whether the action of endotoxin on monocytes can be promoted or inhibited by hormones. Methods: human monocyte tumor cell line THP-1 was selected as the research object. Three different concentrations of dexamethasone 0.1 mMN 0.01mMN 0.001mm were used to stimulate 4 h and 12 h respectively for 24 h. Flow cytometry was used to detect the number of tissue factor positive membrane particles and the total membrane particles in the supernatant and the proportion of TF positive membrane particles in the supernatant. The procoagulant activity of supernatant was measured by one-stage coagulation time. CD14 antibody was used to capture the membrane particles and the tissue factor activity related to the membrane particles was determined. The mRNA level of tissue factor in cells was measured by fluorescence real-time quantitative PCR. Results: except for 4h-0.001mM group, the number of TF positive membrane particles released by hormone stimulation group was 1.5-3 times higher than the base value, and the total membrane particles was 1.3-2.5 times higher than the base value. The dose of dexamethasone was positively correlated with the number of TF positive membrane particles (r = 0.673, p0.001), and with the number of total membrane particles (r = 0.804, p0. 001). Hormones did not promote the release of TF positive membrane particles from THP-1 cells stimulated by LPS. TF on the surface of TF positive membrane particles released by dexamethasone stimulated THP-1 cells was active. The coagulation time of the supernatant stimulated by dexamethasone in THP-1 cells was significantly shorter than that in the negative control group (p0.05) and the coagulation time was negatively correlated with the number of TF positive membrane particles in the supernatant of the same sample (4h r-0.762pt0. 028 h r=-0.833p=0.010). Dexamethasone significantly decreased the level of TF-mRNA (p0.01) 0.01 mm at 12 h and 24 h after stimulation, and increased the level of TF-mRNA (p0.01). TF-mRNA was not correlated with coagulation time. Conclusion: Dexamethasone stimulated THP-1 cells to release more TF positive membrane particles than the basic amount. These membrane particles have TF activity. The number of these particles is positively correlated with the dose of dexamethasone and has a certain correlation with the blood coagulation intensity. This effect of dexamethasone is not derived from the regulation of transcriptional levels.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2206413