【摘要】： 化療是治療進(jìn)展期胃癌的重要手段,阿霉素作為最常用的化療藥物之一,臨床上常與其他化療藥物(如5-氟尿嘧啶、順鉑)配伍用于胃癌的化療,但是臨床上胃癌化療的效果并不滿意,有文章報(bào)道胃癌對(duì)阿霉素的敏感性僅為30%,其中最主要的原因是胃癌細(xì)胞具有天然耐藥或者在化療過(guò)程通過(guò)接觸化療藥物中獲得耐藥性。因此,提前預(yù)測(cè)胃癌患者是否對(duì)阿霉素敏感對(duì)于化療效果非常重要,然而目前臨床并未常規(guī)開(kāi)展藥物敏感性檢測(cè)的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),主要原因在于其細(xì)胞培養(yǎng)周期長(zhǎng)、易污染、難于標(biāo)準(zhǔn)化。利用基因芯片技術(shù)預(yù)測(cè)化療藥物敏感性已見(jiàn)諸報(bào)道,但此方法耗資巨大,對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件條件要求較高,同樣也難以臨床常規(guī)開(kāi)展。為此我們?cè)诒狙芯恐刑接懯欠窨赡芾没蛐酒峁┑男畔?獲得一些能夠預(yù)測(cè)胃癌細(xì)胞阿霉素敏感性的關(guān)鍵分子,建立阿霉素耐藥預(yù)測(cè)模型。 【目的】利用基因芯片信息建立胃癌阿霉素敏感性多分子預(yù)測(cè)模型,用于輔助臨床化療決策。 【方法】1. cDNA微陣列分析技術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞及其阿霉素耐藥細(xì)胞SGC7901與SGC-7901/ADR全基因表達(dá)譜間的差異基因;2.從斯坦福大學(xué)基因芯片數(shù)據(jù)庫(kù)(http://genome-www5.stanford.edu)引入另外一株胃癌阿霉素耐藥細(xì)胞EPG-257RDB及其親本細(xì)胞EPG-257P的全基因表達(dá)譜并分析其差異性基因;3.比較兩個(gè)細(xì)胞系間的共同差異性基因;4.利用cDNA微陣列分析軟件PAM篩選后續(xù)實(shí)驗(yàn)的目的基因;5.采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)人胃癌組織標(biāo)本中目的基因的表達(dá)情況;6.采用胃癌原代細(xì)胞培養(yǎng)法測(cè)定人胃癌標(biāo)本阿霉素敏感性;7.利用統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)人胃癌組織標(biāo)本中目的基因的表達(dá)情況及阿霉素敏感性作多元回歸分析,建立多分子預(yù)測(cè)模型;8.對(duì)驗(yàn)證組的胃癌標(biāo)本作相同的處理并統(tǒng)計(jì)分析多元回歸模型的可靠性。 【結(jié)果】1.胃癌細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞SGC7901與SGC-7901/ADR對(duì)比共發(fā)現(xiàn)差異性基因471個(gè);EPG-257RDB與其親本細(xì)胞EPG-257P對(duì)比共發(fā)現(xiàn)差異性基因10,144個(gè);2.通過(guò)對(duì)比兩個(gè)細(xì)胞系的胃癌細(xì)胞及其阿霉素耐藥細(xì)胞的全基因表達(dá)譜,得到90個(gè)在表達(dá)上具有相同趨勢(shì)的差異性基因,其中僅PJA1在耐藥細(xì)胞低表達(dá),余基因均在耐藥細(xì)胞中高表達(dá);3.利用cDNA微陣列分析軟件PAM篩選后得到7個(gè)與阿霉素化療敏感性相關(guān)的候選基因,分別是ADAM22、CYR61、IFITM1、FN1、SPHK1、G1P2、GNAI1,均在耐藥細(xì)胞中高表達(dá);4.利用NLReg統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)20例人胃癌組織標(biāo)本中候選基因的表達(dá)情況及阿霉素敏感性作多元回歸分析,建立多分子阿霉素敏感性預(yù)測(cè)模型;此模型中IFITM1和G1P2這兩個(gè)基因被排除,預(yù)測(cè)模型的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.8838;5. 19例人胃癌組織標(biāo)本給予同上的處理,對(duì)目的基因的表達(dá)情況及阿霉素敏感性結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,證明建立的多分子阿霉素敏感性預(yù)測(cè)模型有效(r = 0.7316);6.對(duì)胃癌新鮮組織標(biāo)本進(jìn)行HDRA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)阿霉素的敏感性低于30%。 【結(jié)論】1.建立了基于ADAM22、CYR61、FN1、SPHK1、GNAI1這5個(gè)基因的多分子阿霉素敏感性預(yù)測(cè)模型,并經(jīng)驗(yàn)證可用于臨床胃癌患者化療前的阿霉素耐藥的評(píng)估;2.胃癌對(duì)阿霉素耐藥情況普遍,利用預(yù)告模型對(duì)阿霉素的耐藥性進(jìn)行預(yù)測(cè)有助于提高化療療效;3.在對(duì)耐藥細(xì)胞的全基因組篩選中,預(yù)先進(jìn)行脫藥培養(yǎng)有助于減少細(xì)胞凋亡途徑相關(guān)基因的干擾,獲得影響其敏感性的關(guān)鍵基因。
[Abstract]:Chemotherapy is an important method for the treatment of advanced gastric cancer. As one of the most commonly used chemotherapeutic drugs, adriamycin is often used in combination with other chemotherapeutic drugs (such as 5-fluorouracil, cisplatin) in clinic. However, the effect of chemotherapy for gastric cancer is unsatisfactory. It has been reported that the sensitivity of gastric cancer to adriamycin is only 30%, the most important of which is adriamycin. The reason is that gastric cancer cells have natural resistance or acquire resistance through exposure to chemotherapy drugs. Therefore, it is very important to predict whether gastric cancer patients are susceptible to adriamycin in advance. However, there is no routine clinical cytological test for drug sensitivity testing, mainly because of its cell culture. Gene chip technology has been reported to predict chemosensitivity, but this method is expensive, requires high hardware conditions in the laboratory, and is also difficult to carry out routine clinical practice. A predictive model for adriamycin resistance was established to predict the sensitivity of gastric cancer cells to adriamycin.
[Objective] To establish a multi-molecular prediction model of adriamycin sensitivity in gastric cancer by using gene chip information for assisting clinical chemotherapy decision-making.
[Methods] 1. Differential gene expression profiles between gastric cancer cells and their doxorubicin-resistant cells SGC7901 and SGC-7901/ADR were detected by cDNA microarray analysis; 2. Another doxorubicin-resistant cell line EPG-257RDB and its parent cell EPG-257P were introduced from the Stanford University Gene Chip Database (http://genome-ww5.stanford.edu). Total gene expression profiles and differential genes were analyzed; 3. Comparing the common and differential genes between the two cell lines; 4. Screening the target genes of the follow-up experiment by using cDNA microarray analysis software PAM; 5. Detecting the expression of target genes in human gastric cancer tissues by RT-PCR; 6. Detecting the expression of target genes in human gastric cancer by primary cell culture method. Specimens sensitivity to adriamycin; 7. Using statistical software for human gastric cancer tissue specimens in the expression of the target gene and adriamycin sensitivity multivariate regression analysis, to establish a multimolecular prediction model; 8. To verify the same treatment of gastric cancer specimens and statistical analysis of the reliability of the multivariate regression model.
[Results] A total of 471 differentially expressed genes were found in gastric cancer cells and their drug-resistant cells SGC7901 and SGC-7901/ADR; 10,144 differentially expressed genes were found in EPG-257RDB and its parental cells EPG-257P; and 90 differentially expressed genes were obtained by comparing the whole gene expression profiles of gastric cancer cells and their doxorubicin-resistant cells. Among them, only PJA1 was low expressed in drug-resistant cells, and the remaining genes were high expressed in drug-resistant cells. 3. Seven candidate genes related to chemotherapy sensitivity of adriamycin, ADAM22, CYR61, IFITM1, FN1, SPHK1, G1P2, GNAI1, were high expressed in drug-resistant cells after screening by cDNA microarray analysis software PAM. The expression of candidate genes and their sensitivity to adriamycin in 20 human gastric cancer tissues were analyzed by using NLReg statistical software and a multivariate regression model was established to predict the sensitivity to adriamycin. The expression of the target gene and the results of adriamycin sensitivity were validated, which proved that the multi-molecule adriamycin sensitivity prediction model was effective (r = 0.7316). 6. The sensitivity of adriamycin was less than 30% in fresh gastric cancer tissues detected by HDRA.
[Conclusion] 1. Established the multi-molecule adriamycin sensitivity prediction model based on ADAM22, CYR61, FN1, SPHK1, GNAI1 genes, and proved that it can be used to evaluate the adriamycin resistance of gastric cancer patients before chemotherapy. 2. The drug resistance of gastric cancer to adriamycin is common, and the prediction model is helpful to improve the adriamycin resistance. Chemotherapeutic effect; 3. In genome-wide screening of drug-resistant cells, pre-drug-free culture is helpful to reduce the interference of apoptosis pathway-related genes and obtain the key genes affecting their sensitivity.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R735.2;R-332

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本文編號(hào)：2189763