發(fā)布時(shí)間：2018-08-18 10:07

【摘要】： 目的觀察經(jīng)口感染弓形蟲速殖子在小鼠小腸組織、實(shí)質(zhì)器官內(nèi)的動態(tài)分布,探討弓形蟲病的機(jī)制;動態(tài)觀察弓形蟲速殖子經(jīng)口感染小鼠誘導(dǎo)IgA分泌細(xì)胞及抗體應(yīng)答,分析兩者的相關(guān)性,探討IgA分泌細(xì)胞在抗弓形蟲感染的黏膜免疫應(yīng)答中的可能作用;觀察STAg鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的小腸抗體分泌細(xì)胞及抗體水平動態(tài)變化,探討STAg鼻內(nèi)免疫對小鼠小腸黏膜不同部位IgA分泌細(xì)胞在抗弓形蟲感染的黏膜免疫反應(yīng)過程中的作用。 方法BALB/c小鼠96只,隨機(jī)選取12只用0.5 ml/只PBS灌胃(對照組),其余小鼠用RH株弓形蟲速殖子1×10~4個灌胃感染,分別于感染后2 d、4 d、6 d、8 d、10 d、12 d、14 d隨機(jī)處死12只,取十二指腸、空腸、回腸、肝臟、脾、腎、肺、心和腦做組織印片,吉-瑞氏染色,鏡檢;免疫組化檢測十二指腸、空腸和回腸黏膜中IgA分泌細(xì)胞數(shù)量變化,ELISA法測定小腸液IgA及血清IgG、IgA水平。 5～6周齡BABL/c小鼠96只,隨機(jī)分為免疫組和對照組。免疫組用弓形蟲可溶性速殖子抗原(STAg)20μg/只滴鼻免疫2次,間隔2周;對照組用20μl PBS代替。末次免疫后1周,灌胃攻擊感染弓形蟲速殖子1×10~4個/只。觀察小鼠發(fā)病情況,于感染后6 d、7 d、8 d、9 d、10 d和11 d,分別頸椎脫臼處死免疫組和對照組小鼠各8只。免疫組化檢測小腸不同部位黏膜中IgA分泌細(xì)胞;ELISA法測定血清IgG、IgA及腸液IgA水平。 結(jié)果感染后2 d在十二指腸、空腸、回腸、肺和心,4 d在脾,6 d在腎和肝臟發(fā)現(xiàn)蟲體,腦內(nèi)未發(fā)現(xiàn)蟲體。十二指腸、空腸、回腸組織內(nèi)蟲體數(shù)量呈上升趨勢,第6 d達(dá)高峰后稍有下降。肝內(nèi)蟲體數(shù)量呈上升趨勢,第6 d最多;脾內(nèi)蟲體數(shù)量在6 d達(dá)峰值后保持較高水平;實(shí)驗(yàn)期間腎、肺和心內(nèi)蟲體數(shù)量保持較低水平階段。 小腸IgA分泌細(xì)胞分布于小腸黏膜的固有層中,不同腸段IgA分泌細(xì)胞數(shù)量的變化規(guī)律各異。十二指腸黏膜IgA分泌細(xì)胞數(shù)量隨感染后時(shí)間的推移,呈上升趨勢�？漳c黏膜的IgA分泌細(xì)胞數(shù)量在感染后2～8 d升高,隨后下降,至14 d下降到感染前水平�；啬c黏膜IgA分泌細(xì)胞數(shù)量在感染后2～6 d升高,隨后下降,至12 d下降到低于感染前水平。感染后,小腸液IgA水平持續(xù)增高,血清IgA無變化IgG呈增高趨勢。十二指腸、空腸和回腸黏膜的IgA分泌細(xì)胞數(shù)量與小腸液IgA的相關(guān)性分別為r=0.732(P＜0.001)、r=0.116(P=0.455)和r=-0.429(P＜0.005)。 STAg鼻內(nèi)免疫小鼠后小腸IgA分泌細(xì)胞量變化規(guī)律為:在十二指腸黏膜內(nèi)隨感染天數(shù)增加逐漸增高;在空腸和回腸黏膜內(nèi)隨感染天數(shù)增加先上升后下降,對照組回腸黏膜內(nèi)11 d低于6 d,其它11 d都高于6 d;免疫組始終高于對照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。小腸沖洗液IgA在第7 d降低,之后免疫組緩緩上升,對照組趨于平穩(wěn);血清IgA先下降后上升之后又下降;血清IgG趨勢穩(wěn)定;免疫組始終高于對照組,各項(xiàng)指標(biāo)組內(nèi)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,組間比較差異顯著(P＜0.05)。 結(jié)論弓形蟲經(jīng)口感染小鼠后2 d,小腸組織出現(xiàn)大量速殖子;同時(shí)肺和心內(nèi)有少量速殖子;4 d在脾、6 d在腎和肝臟發(fā)現(xiàn)蟲體;速殖子在上述組織內(nèi)增殖,并形成假包囊,腦內(nèi)未發(fā)現(xiàn)蟲體。 弓形蟲經(jīng)口感染小鼠可誘導(dǎo)十二指腸IgA分泌細(xì)胞高水平表達(dá)和小腸液中的IgA水平增高,兩者呈正相關(guān)。小腸液中高水平的IgA主要由十二指腸黏膜的IgA分泌細(xì)胞分泌。 STAg鼻內(nèi)免疫小鼠可誘導(dǎo)十二指腸黏膜固有層IgA分泌細(xì)胞高表達(dá),小腸液和血清IgA水平升高,提示STAg在抗弓形蟲感染中發(fā)揮作用。
[Abstract]:Objective To observe the dynamic distribution of Toxoplasma gondii tachyzoites in intestinal tissues and parenchymal organs of mice infected by oral infection and explore the mechanism of Toxoplasma gondii infection. To observe the dynamic changes of antibody secreting cells and antibody levels induced by STAg intranasal immunization in mice, and to explore the role of STAg intranasal immunization in the mucosal immune response to Toxoplasma gondii infection.
Methods 96 BALB/c mice were randomly selected and 12 mice were given 0.5 ml/PBS (control group). The remaining mice were given RH strain of Toxoplasma gondii tachyzoites 1 *10~4. Twelve mice were sacrificed at random 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 14 days after infection. Duodenum, jejunum, ileum, liver, spleen, kidney, lung, heart and brain were taken for tissue imprinting, Gi-Rayleigh staining and microscopic examination. The number of IgA secreting cells in duodenum, jejunum and ileum was detected by immunohistochemistry, and the levels of IgA in intestinal fluid and serum IgG and IgA were determined by ELISA.
96 BABL/c mice aged 5-6 weeks were randomly divided into immunization group and control group.The immunization group was immunized with 20 UG of STAg by nasal drip twice at intervals of 2 weeks.The control group was immunized with 20 UG of PBS instead.One week after the last immunization,the mice were attacked by gastric lavage with 1 6550 On the 9th, 10th and 11th day, 8 mice in the immune group and 8 mice in the control group were sacrificed respectively after cervical dislocation.
Results Insects were found in the duodenum, jejunum, ileum, lung and heart 2 days after infection, 4 days in the spleen, 6 days in the kidney and liver, but not in the brain. Maintain a high level; during the experiment, the number of kidney, lung and heart worms remained at a low level.
The number of IgA secreting cells in the duodenal mucosa increased with the passage of time after infection. The number of IgA secreting cells in the jejunal mucosa increased 2-8 days after infection, and then decreased to the pre-infection water 14 days after infection. The number of IgA secreting cells in the ileal mucosa increased from 2 to 6 days after infection, then decreased to below the pre-infection level at 12 days after infection. After infection, the IgA level in the small intestinal fluid continued to increase, while the serum IgA remained unchanged. The correlation between the number of IgA secreting cells in the duodenum, jejunum and ileum and the IgA level in the small intestinal fluid was r=0.732 (P<0.732). .001), r=0.116 (P=0.455) and r=-0.429 (P < 0.005).
The changes of intestinal IgA secretory cells in STAg intranasal immunized mice were as follows: in duodenal mucosa, IgA secretory cells increased gradually with the days of infection; in jejunum and ileum mucosa, IgA secretory cells increased first and then decreased with the days of infection; in the control group, IgA secretory cells in ileum mucosa for 11 days were lower than 6 days; in the other 11 days, IgA secretory cells in the immunized group were higher than those in the control group, but there was no statistical significance. The IgA of the small intestine flushing fluid decreased on the 7th day, then increased slowly in the immune group, and then stabilized in the control group. The serum IgA decreased first, then increased and then decreased; the trend of serum IgG was stable; the immune group was always higher than the control group, and there was no significant difference in the indexes between the two groups (P < 0.05).
Conclusion A large number of tachyzoites appeared in the small intestine 2 days after oral infection of Toxoplasma gondii, and a small number of tachyzoites were found in the lungs and hearts; worms were found in the spleen 4 days after infection and in the kidney and liver 6 days after infection; tachyzoites proliferated in the above tissues and formed pseudocysts, but no worms were found in the brain.
Toxoplasma gondii oral infection can induce the high level expression of IgA secreting cells in duodenum and the high level of IgA secreting cells in intestinal fluid.
STAg intranasal immunization could induce high expression of IgA secreting cells in the lamina propria of duodenum, and elevate the levels of IgA in intestinal fluid and serum, suggesting that STAg might play a role in the anti-Toxoplasma gondii infection.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：2189141