【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌(MTB)16k D-CFP10-19k D融合蛋白表達載體,在大腸桿菌中對蛋白進行表達并經(jīng)過純化獲得16k D-CFP10-19k D融合蛋白。方法利用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)方法以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組為模板擴增16k D、CFP10及19k D基因,經(jīng)過限制性內(nèi)切酶處理并依次與p ET28a載體連接,構(gòu)建p ET28a-16k D-CFP10-19k D重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達株BL21中,在IPTG及低溫誘導下獲得目標蛋白,鎳柱層析獲得純化蛋白。結(jié)果經(jīng)過酶切及測序鑒定驗證p ET28a-16k D-CFP10-19k D重組質(zhì)粒構(gòu)建正確,原核表達獲得可溶性目標蛋白并對其初步純化。結(jié)論成功構(gòu)建表達并純化獲得16k D-CFP10-19k D融合蛋白,為開發(fā)新的結(jié)核病特異性診斷抗原研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct (MTB) 16k D-CFP10-19k D fusion protein expression vector of Mycobacterium tuberculosis and express the fusion protein in Escherichia coli and obtain 16k D-CFP10-19k D fusion protein. Methods 16kD CFP10 and 19kD genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using the H37Rv genome of Mycobacterium tuberculosis as template. The recombinant plasmid of p ET28a-16k D-CFP10-19k D was constructed by restriction endonuclease treatment and sequentially ligated with p ET28a vector. The target protein was obtained by IPTG and low temperature induction, and the purified protein was obtained by nickel column chromatography. Results the recombinant plasmid of p ET28a-16k D-CFP10-19k D was constructed correctly by restriction endonuclease digestion and sequencing. The soluble target protein was obtained by prokaryotic expression and purified. Conclusion 16k D-CFP10-19k D fusion protein was successfully constructed and purified, which laid a foundation for the development of new TB specific diagnostic antigen.
【作者單位】： 沈陽市第四人民醫(yī)院兒科;沈陽萬類生物科技有限公司;
【分類號】：R378.911

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