【摘要】：目的:研究不同培養(yǎng)環(huán)境對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)和Th17細(xì)胞分化的影響,探索能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤微環(huán)境誘導(dǎo)的免疫耐受的手段。方法:克隆人白介素-6(IL-6)的基因,將其轉(zhuǎn)入表達(dá)TGF-β的腫瘤細(xì)胞株中,并篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)系;分別收集含或不含IL-6的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清,制備成條件培養(yǎng)基(Conditioned medium,CM),用于體外培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),流式檢測PBMC在不同培養(yǎng)環(huán)境中Treg和Th17細(xì)胞的變化情況。結(jié)果:RTPCR分析表明BEL-7402表達(dá)TGF-β的水平明顯高于Hep G2,因此選擇BEL-7402用于制備IL-6的穩(wěn)轉(zhuǎn)系;ELISA檢測結(jié)果表明所制備的穩(wěn)轉(zhuǎn)系能夠有效地表達(dá)IL-6;流式結(jié)果表明,由腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清制備的CM能明顯誘導(dǎo)T細(xì)胞分化為Treg,而在IL-6存在的情況下則能明顯抑制Treg細(xì)胞的形成,并促進(jìn)T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞。結(jié)論:腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清促使PBMC中Treg比例增加;而在其中添加IL-6則能夠降低Treg細(xì)胞比例,并增加Th17細(xì)胞的比例。
[Abstract]:Aim: to study the effects of different culture environments on the differentiation of regulatory T cell (regulatory T cells and Th17 cells, and to explore ways to reverse the immune tolerance induced by tumor microenvironment. Methods: the human interleukin-6 (IL-6) gene was cloned and transferred into the tumor cell line expressing TGF- 尾, and the stable transformation lines were screened, and the supernatants of tumor cells containing or without IL-6 were collected, respectively. A conditioned medium (Conditioned medium CM) was prepared for the culture of human peripheral blood monocytes (Peripheral blood mononuclear cells in vitro. The changes of Treg and Th17 cells in different culture environments were detected by flow cytometry. Results the level of TGF- 尾 expression in BEL-7402 was significantly higher than that in Hep G2. The results of Elisa showed that TGF- 尾 could express IL-6 effectively by using BEL-7402 to prepare IL-6, and flow cytometry showed that TGF- 尾 could express IL-6 effectively. The CM prepared from the supernatant of tumor cell culture could induce T cells to differentiate into Tregs, but in the presence of IL-6, it could inhibit the formation of Treg cells and promote the differentiation of T cells into Th17 cells. Conclusion: the supernatant of tumor cell culture can increase the proportion of Treg in PBMC, but the addition of IL-6 can decrease the proportion of Treg cells and increase the proportion of Th17 cells.
【作者單位】： 廣東藥學(xué)院生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院/廣東省生物技術(shù)候選藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31100664,31300737,81303292) 廣東省自然科學(xué)基金(No.10151022401000024,2014A030313586) 廣東藥學(xué)院師資隊(duì)伍建設(shè)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)的資助
【分類號(hào)】：R392.12

【共引文獻(xiàn)】

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7 陳

本文編號(hào)：2173899