【摘要】： 目的:隨著神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫相互作用研究的不斷深入,目前已知在淋巴細(xì)胞上具有α-和β-腎上腺素受體,并且它們都參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能。然而,盡管已有文獻(xiàn)報(bào)道淋巴細(xì)胞上也存在多巴胺(dopamine, DA)受體,但關(guān)于T淋巴細(xì)胞上存在哪種亞型DA受體,以及這些受體在介導(dǎo)T細(xì)胞功能調(diào)節(jié)中的作用尚不十分清楚。因此,本研究旨在一方面提供T淋巴細(xì)胞表達(dá)DA兩類亞型受體  D1-like受體(包括D1和D5受體)和D2-like受體(包括D2、D3、D4受體)的證據(jù),另一方面探討D1-like受體和D2-like受體在介導(dǎo)T細(xì)胞功能調(diào)節(jié)中的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,從而為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)增加新內(nèi)容。 方法:取小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞,用尼龍毛柱粘附法分離和純化T淋巴細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞的純度。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的各種亞型DA受體mRNA表達(dá)。淋巴細(xì)胞用各種濃度的D1-like受體激動(dòng)劑、拮抗劑或D2-like受體激動(dòng)劑、拮抗劑孵育48 h,然后應(yīng)用噻唑蘭(methyl-thiazole-tetrazolium, MTT)比色法檢測(cè)淋巴細(xì)胞對(duì)有絲分裂原  刀豆蛋白A(concanavalin A, Con A)誘導(dǎo)的增殖反應(yīng);應(yīng)用流式蛋白分析系統(tǒng)測(cè)定經(jīng)Con A刺激的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液中細(xì)胞因子干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)和白介素-4(interleukin-4,IL-4)的濃度;應(yīng)用125I-環(huán)一磷酸腺苷(125I-cAMP)放射免疫法檢測(cè)淋巴細(xì)胞內(nèi)環(huán)一磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量。 結(jié)果:腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞經(jīng)分離和純化后,獲得的CD3+淋巴細(xì)胞(即T淋巴細(xì)胞)在腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞中的百分比為93.8±0.53%,明顯高于未經(jīng)分離和純化的腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞中的T細(xì)胞百分比74.1±0.95%,說(shuō)明用上述方法已獲得純化的T淋巴細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞可表達(dá)所有DA亞型受體mRNA,包括D1-like受體的D1和D5受體,及D2-like受體的D2、D3、D4受體。淋巴細(xì)胞分別用5個(gè)濃度的D1-like受體激動(dòng)劑SKF38393(10-9～10-5 M)處理后,細(xì)胞對(duì)Con A誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)均沒(méi)有發(fā)生明顯的改變。用Con A刺激的淋巴細(xì)胞經(jīng)SKF38393(10-8 M)處理后,IFN-γ的產(chǎn)生顯著低于未經(jīng)SKF38393處理的淋巴細(xì)胞,但TNF和IL-4的產(chǎn)生沒(méi)有明顯改變。D1-like受體拮抗劑SCH23390(10-7 M)能阻斷激動(dòng)劑SKF38393(10-8 M)對(duì)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的抑制作用。D1-like受體激動(dòng)劑、拮抗劑或激動(dòng)劑與拮抗劑一起處理淋巴細(xì)胞,均沒(méi)有明顯影響淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP的含量。上述結(jié)果說(shuō)明,D1-like受體在介導(dǎo)T細(xì)胞功能調(diào)節(jié)中不起主導(dǎo)作用。然而,淋巴細(xì)胞分別用5個(gè)濃度的D2-like受體激動(dòng)劑quinpirole(10-9～10-5 M)處理后,細(xì)胞對(duì)Con A誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)均明顯減弱。用不同濃度的D2-like受體拮抗劑haloperidol(10-10～10-7 M)與激動(dòng)劑quinpirole(10-8 M或10-7 M)一起處理淋巴細(xì)胞,haloperidol呈現(xiàn)濃度依賴性地阻斷quinpirole對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用。quinpirole(10-8 M)可抑制Con A刺激的T細(xì)胞生成IFN-γ和TNF,但促進(jìn)T細(xì)胞生成IL-4。haloperidol(10-7 M)能阻斷quinpirole抑制T細(xì)胞生成IFN-γ和TNF的作用,及阻斷quinpirole促進(jìn)T細(xì)胞生成IL-4的作用。上述結(jié)果充分說(shuō)明D2-like受體介導(dǎo)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能。此外,quinpirole(10-8 M和10-7 M)可導(dǎo)致Con A激活的T細(xì)胞內(nèi)cAMP含量明顯減少,haloperidol(10-8 M和10-7 M)則可阻斷quinpirole減少淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP的作用,提示cAMP參與D2-like受體介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞功能調(diào)節(jié)。 結(jié)論:T淋巴細(xì)胞能表達(dá)各種DA亞型受體  D1、D5受體(即D1-like受體)及D2、D3、D4受體(即D2-like受體)。在D1-like和D2-like兩型DA受體中,D2-like受體是介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的主要受體,它的激活能抑制T淋巴細(xì)胞的增殖、減少細(xì)胞因子IFN-γ和TNF的生成及增加IL-4的生成,D2-like受體的這些作用經(jīng)淋巴細(xì)胞內(nèi)第二信使cAMP介導(dǎo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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2 程p，

本文編號(hào)：2163259