【摘要】：EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)屬皰疹病毒科嗜B淋巴細胞病毒,已知它與多種人類惡性腫瘤相關(guān)。EBV相關(guān)鼻咽癌(nasopharyngeall carcinoma,NPC)是上皮來源的惡性腫瘤,高發(fā)于東南亞及我國華南地區(qū)。江蘇目前發(fā)病率也在不斷增高,平均每周新增病例10～20例,每年約960例新發(fā)病例。臨床上NPC不能手術(shù)治療,主要是通過放療和化療,但這種治療方法并不能完全有效地清除腫瘤細胞,而且副反應(yīng)較大,部分患者易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此在傳統(tǒng)治療方案的基礎(chǔ)上加以生物治療,發(fā)展以CTL為基礎(chǔ)的免疫治療已成為目前研究的方向。病毒蛋白在NPC腫瘤細胞中呈潛伏Ⅱ型表達,即僅表達EBV核抗原(EBNA1)和EBV潛伏膜蛋白(LMP1、LMP2A,2B)。其中LMP2A是一個疏水蛋白,本身不是轉(zhuǎn)化基因,序列相對保守,且在腫瘤組織中能持續(xù)表達,并含有多種受HLA限制的CTL表位,被認為是EBV相關(guān)NPC免疫治療的理想靶抗原。 我們以往的研究表明,樹突狀細胞轉(zhuǎn)染LMP2A重組腺病毒載體或負載LMP2A蛋白后可激發(fā)特異性CTL反應(yīng)。本研究進一步根據(jù)NPC患者常見的HLA型別(以HLA-A2為主),采用生物信息學(xué)方法,利用三種不同的計算機軟件,SYFPEITHI(http: //www.uni-tuebingen.de/uni/kxi/),NetMHC(http: //www. jenner.ac.uk/MHCPred/)和MHCPred(http://www.cbs.dtu.dk/services/ NetMHC-2.0/)分析LMP2A蛋白全長序列,預(yù)測并合成了六條HLA-A2限制性的CTL候選表位肽。隨后在EBV健康攜帶者和NPC患者中進行體外實驗(包括酶聯(lián)免疫斑點試驗、胞內(nèi)細胞因子檢測和細胞殺傷試驗),對候選肽段進行功能上的分析驗證,最終確定了三條有效的LMP2A特異性的表位,分別是: LMP2A264 (QLSPLLGAV)、LMP2A426 (CLGGLLTMV)和LMP2A356 (FLYALALLL)。其中LMP2A264 (QLSPLLGAV)為本實驗首次鑒定的新的LMP2A特異性表位。體外實驗結(jié)果顯示這三條肽段均可以有效的誘導(dǎo)CTL反應(yīng),殺傷表達LMP2A蛋白的特異性靶細胞。進一步采用有限稀釋法建立了三株多肽特異性的T細胞克隆,經(jīng)鑒定為兩株多肽CLGGLLTMV特異性克隆和一株多肽QLSPLLGAV特異性克隆,并對克隆進行了表型和功能的初步分析。 綜上所述,本研究采用生物信息學(xué)與體外實驗相結(jié)合的方法,①鑒定了三條HLA-A2限制性的LMP2A特異性表位肽;②無論在EBV健康攜帶者還是在NPC患者中,這三條表位肽均可有效地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答;③通過T細胞克隆技術(shù),得到了針對其中兩條表位肽的三株CD8+T細胞克隆。所得結(jié)果將有助于闡明T淋巴細胞在控制EBV感染中的作用,對發(fā)展EBV相關(guān)腫瘤多肽疫苗,為NPC及其他病毒相關(guān)性腫瘤的免疫治療提供理論和實驗依據(jù)。
[Abstract]:Epstein-Barr virus (EBV) belongs to B lymphocytic virus of herpes viridae. It is known that EBV-associated nasopharyngeal carcinoma (nasopharyngeall carcinoma-NPC) is an epithelial-derived malignant tumor, which is highly prevalent in Southeast Asia and South China. The incidence rate in Jiangsu is increasing, with an average of 10 new cases per week, and about 960 new cases per year. Clinically, NPC can not be treated surgically, mainly through radiotherapy and chemotherapy, but this method can not completely and effectively remove tumor cells, and the side effects are larger, some patients are prone to recurrence and metastasis. Therefore, biotherapy based on traditional therapy and immunotherapy based on CTL has become the research direction. The viral protein was expressed as latent type 鈪，

本文編號：2154130