【摘要】： 建立檢測(cè)單增李斯特菌(LM)的快速檢測(cè)方法,對(duì)人類健康及畜牧業(yè)生產(chǎn)具有重要的意義和應(yīng)用前景。本研究選取致病性李斯特菌特異性蛋白—肌動(dòng)蛋白聚合蛋白(ActA)為對(duì)象,利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)ActA融合蛋白,以親合層析純化表達(dá)產(chǎn)物,獲得了較高純度的表達(dá)蛋白ActA。以純化的ActA蛋白免疫小鼠進(jìn)行免疫原性研究,結(jié)果表明ActA可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫,為以ActA蛋白為靶抗原,建立LM免疫學(xué)檢測(cè)方法的研究及LM疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。以LM為免疫抗原免疫Balb/c小鼠,以純化的ActA蛋白作為ELISA檢測(cè)的包被抗原,制備LM特異性單克隆抗體并進(jìn)行特性分析,辛酸—硫酸銨法結(jié)合G—蛋白親合層析法純化單抗腹水,選取兩株純化的單抗分別用于免疫膠體金的標(biāo)記和膠體金試紙檢測(cè)線的包被,研制檢測(cè)LM的膠體金試紙,研究結(jié)果表明該試紙具有較高的敏感性和特異性,可以從模擬樣本中有效地檢出LM。
[Abstract]:To establish a rapid detection method for Listeria monocytogenes (LM) has important significance and application prospect for human health and animal husbandry production. In this study, (ActA), a specific protein of Listeria sp., was used to express ActA fusion protein by prokaryotic expression system. The expressed product was purified by affinity chromatography, and a high purity expression protein ActA was obtained. The immunogenicity of mice immunized with purified ActA protein was studied. The results showed that ActA could stimulate specific cellular and humoral immunity, and ActA protein was used as target antigen. The establishment of LM immunological detection method and the development of LM vaccine laid a foundation. Balb/c mice were immunized with LM as immune antigen. The purified ActA protein was used as the coating antigen for ELISA detection. The monoclonal antibody against LM was prepared and its characteristics were analyzed. The monoclonal antibody ascites were purified by octanoic acid-ammonium sulfate method combined with G-protein affinity chromatography. Two purified McAbs were used to label immune colloidal gold and coated with colloidal gold test paper to prepare the colloidal gold test paper for LM detection. The results showed that the test paper had high sensitivity and specificity. LM can be effectively detected from simulated samples.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R378;S854.43

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本文編號(hào)：2150930