【摘要】： 目的: 構(gòu)建CRMP-5-pEGFP-C2真核表達載體,探討坍塌反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白-5(Collapsinresponse mediator protein-5,CRMP-5)過表達情況下對大鼠海馬神經(jīng)元突起生長的影響。 材料和方法: 提取新生6d SD大鼠腦海馬組織總RNA,RT-PCR擴增目的基因cDNA并克隆到pEGFP-C2真核表達載體上。原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元,脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染CRMP-5-pEGFP-C2真核表達載體,通過綠色熒光蛋白示蹤觀察其表達部位及突起生長情況。 結(jié)果: (1)成功擴增CRMP-5基因cDNA,構(gòu)建了CRMP-5-pEGFP-C2真核表達載體,經(jīng)測序與genebank的序列同源性為100%。(2)脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染后,空載體轉(zhuǎn)染組少量細胞顯示綠色熒光,且均勻分布于胞體和突起,突起長度和分支數(shù)目與空白對照組無明顯差異;CRMP-5-pEGFP-C2轉(zhuǎn)染組表達綠色熒光蛋白的細胞數(shù)量較空載體組多,熒光于胞體、突起末端及分支處較突起中段強,細胞突起明顯較其他兩組綿長,多數(shù)陽性細胞具有超過胞體直徑數(shù)十倍的突起,相互交錯形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),并向遠端延伸。 結(jié)論: (1)成功構(gòu)建了CRMP-5-pEGFP-C2真核表達載體。(2)CRMP-5表達于海馬神經(jīng)元的胞體和突起。(3)CRMP-5過表達時細胞突起延伸明顯且次級突起數(shù)目增多,表明CRMP-5可能具有促進神經(jīng)元突起生長和分支的作用。
[Abstract]:Aim: to construct CRMP-5-pEGFP-C2 eukaryotic expression vector and to investigate the effect of collapse response regulatory protein -5 (Collapsinresponse mediator protein-5 (CRMP-5) overexpression on neuronal growth in rat hippocampal neurons. Materials and methods: the target gene cDNA was amplified by RT-PCR and cloned into pEGFP-C2 eukaryotic expression vector. Primary cultured rat hippocampal neurons were transiently transfected with CRMP-5-pEGFP-C2 eukaryotic expression vector by liposome method. Results: (1) CRMP-5 gene was amplified successfully, and the eukaryotic expression vector of CRMP-5-pEGFP-C2 was constructed. The sequence homology of CRMP-5-pEGFP-C2 and genebank was 100%. (2) after transient transfection with liposome, a small number of cells in the empty vector transfection group showed green fluorescence. There was no significant difference in length and number of branches between CRMP-5-pEGFP-C2 transfection group and blank vector group. The number of cells expressing green fluorescent protein in CRMP-5-pEGFP-C2 transfection group was higher than that in empty vector group. The neurites were longer than the other two groups, and most of the positive cells had processes more than ten times the diameter of the cell body, which interlaced with each other to form a neural network and extend to the distal end. Conclusion: (1) the eukaryotic expression vector of CRMP-5-pEGFP-C2 was successfully constructed. (2) CRMP-5 was expressed in the cell bodies and processes of hippocampal neurons. (3) when CRMP-5 was overexpressed, the number of secondary processes was increased. The results suggest that CRMP-5 may promote neuronal process growth and branches.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R346

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本文編號：2147505