【摘要】： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎及對稱性、破壞性的關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕卣鞯穆匀硇宰陨砻庖咝约膊��；ぱ椎某志梅磸?fù)發(fā)作,導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)破壞,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸型及功能障礙,血管炎可侵犯全身許多器官,引起系統(tǒng)性病變。半個(gè)世紀(jì)以來,人們提出多種假說來嘗試解釋RA,但是因?yàn)镽A的發(fā)病機(jī)制過于復(fù)雜,臨床上至今尚無有效的治療藥物,因此在臨床上一直需要一種有效的治療RA的藥物。而研究并建立合理有效的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型則是研制開發(fā)有效治療藥物和制訂有效治療措施的關(guān)鍵。 白介素細(xì)胞-1β(IL-1β)是第一個(gè)從滑膜里發(fā)現(xiàn)的可以加速人體軟骨破壞的細(xì)胞因子,雖然導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎的病因目前并無定論。但已經(jīng)有觀點(diǎn)認(rèn)為細(xì)胞因子在關(guān)節(jié)炎的長期病程中有其關(guān)鍵的作用,現(xiàn)在FDA已經(jīng)批準(zhǔn)用IL-1β的受體拮抗劑的基因方法治療關(guān)節(jié)炎。RA是一個(gè)長期的緩慢的炎性因子介導(dǎo)的疾病過程,它的一個(gè)明顯的特征就是不可控制的滑膜增生和豐富的炎性細(xì)胞浸潤以及關(guān)節(jié)的侵蝕性浸潤。在RA的發(fā)病機(jī)理中,細(xì)胞因子間的相互作用包括IL-1β,TNF-α和其它炎性因子。這些因子在激活成纖維因子和長期的關(guān)節(jié)及軟骨破壞中共同起到了決定性的作用。除了參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)外,IL-1β在很多疾病中都發(fā)揮作用,特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。由于傳統(tǒng)藥物在治療中所表現(xiàn)出的單一性和低效性,使人們開始傾向于開發(fā)一種能夠抗細(xì)胞因子的一種新的方法來治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。 為更好的評價(jià)IL-1β抗體的藥理和藥效,也為了更深入的在動物實(shí)驗(yàn)上研究IL-1β的生物學(xué)特性,在借鑒人源IL-1β成功高效表達(dá)的基礎(chǔ)上,本研究通過RT-PCR技術(shù)從LPS刺激過的小鼠胸腺細(xì)胞中成功克隆鼠源IL-1β成熟蛋白基因。通過pSUMO原核表達(dá)載體的重新構(gòu)建,獲得高效表達(dá)的具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,為深入研究和利用IL-1β奠定基礎(chǔ)。 本研究也成功建立了SD大鼠的雞Ⅱ型膠原(雞CII+CFA)關(guān)節(jié)炎動物模型。并通過一系列摸索研究,在原有模型成功建立的基礎(chǔ)上將雞Ⅱ型膠原與佐劑混合免疫大鼠結(jié)合腹腔注射鼠源IL-1β(雞CII+CFA+IL-1β)制備新型的大鼠關(guān)節(jié)炎模型,這種模型從病程期上看要明顯早于只注射雞Ⅱ型膠原(雞CII+CFA)的模型組,從炎癥的嚴(yán)重程度上來看,也要明顯高于雞Ⅱ型膠原(雞CII+CFA)的模型組,因此IL-1β可應(yīng)用于建立RA模型,為研究RA的發(fā)病機(jī)制和研發(fā)治療藥物提供了一種新的建模方法。本研究ELISA的方法檢測了所建立的模型動物血清中抗CII抗體、IL-1β、IL-17和TNF-α水平,結(jié)果表明模型動物血清中抗CII抗體、IL-1β、IL-17和TNF-α水平都有顯著提高,與對照組相比差異顯著(*P0.05)。以關(guān)節(jié)炎指數(shù)、抗CⅡ抗體滴度、細(xì)胞因子水平、組織病理變化和影像學(xué)變化作為評價(jià)指標(biāo),能夠?qū)Υ笫箨P(guān)節(jié)炎模型做出較全面的綜合評價(jià)。結(jié)果表明本方法極大地豐富了RA大鼠模型制備的途徑。
[Abstract]:Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic systemic autoimmune disease characterized by joint synovitis and symmetrical, destructive joint lesions. The persistent recurrent attacks of synovitis lead to articular cartilage and bone destruction, resulting in joint malformation and dysfunction. Vasculitis can invade many organs of the body and cause the system. For half a century, people have put forward a variety of hypotheses to try to explain RA, but because the pathogenesis of RA is too complicated, there is no effective therapeutic drug in clinic so far, so an effective drug for the treatment of RA has been needed in clinical. And the research and establishment of a reasonable and effective animal model of rheumatoid arthritis is developed. The key to developing effective drugs and developing effective treatment measures.
Interleukin cell -1 beta (IL-1 beta) is the first cytokine that can accelerate the destruction of human cartilage from the synovial membrane. Although the cause of arthritis is not conclusive, there is a view that cytokine plays a key role in the long-term course of arthritis. Now, the base of IL-1 beta receptor antagonist has been approved in FDA. The treatment of arthritis.RA is a long-term, slow, inflammatory factor mediated disease process. It is characterized by an incontrollable synovial hyperplasia, rich inflammatory cell infiltration and erosive infiltration of the joints. In the pathogenesis of RA, the interaction of cytokines includes IL-1 beta, TNF- alpha and other inflammatory properties. Factors. These factors play a decisive role in activating fibroblasts and long-term joint and cartilage destruction. In addition to the immune regulation of the body, IL-1 beta plays a role in many diseases, especially rheumatoid arthritis. It is beginning to develop a new anti cytokine method to treat rheumatoid arthritis.
In order to better evaluate the pharmacology and efficacy of IL-1 beta antibody and to study the biological characteristics of IL-1 beta in animal experiments, on the basis of the successful and efficient expression of human IL-1 beta, this study successfully cloned the mouse source IL-1 beta mature protein gene from the mouse thymus stimulated by LPS by RT-PCR technology. Through pSUMO prokaryotic cells. The expression vector was rebuilt to obtain highly bioactive soluble mouse IL-1 beta protein, which lay the foundation for further research and utilization of IL-1 beta.
This study also successfully established an animal model of chicken type II collagen (chicken CII+CFA) arthritis in SD rats, and through a series of exploratory studies, a new model of rat arthritis was prepared by intraperitoneal injection of chicken type II collagen and adjuvant combined with IL-1 beta (chicken CII+CFA+ IL-1 beta) on the basis of the successful establishment of the original model. The model group is obviously earlier than the model group that only injected chicken type II collagen (chicken CII+CFA). From the severity of inflammation, it is also significantly higher than the model group of chicken type II collagen (chicken CII+CFA). Therefore, IL-1 beta can be used to establish the RA model, which provides a new modeling method for the study of the pathogenesis of RA and the research and development of drugs for the treatment of drugs. In this study, the ELISA method was used to detect the anti CII antibody, IL-1 beta, IL-17 and TNF- alpha levels in the model animal serum. The results showed that the levels of anti CII antibody, IL-1 beta, IL-17 and TNF- alpha in the serum of the model animals were significantly higher than those of the control group (*P0.05). The titer of anti C II antibody, the level of cytokines, the level of cytokines, and the level of cytokines, and the levels of cytokines, and the levels of cytokines, and the levels of cytokines, and the levels of cytokines, and the levels of cytokines, and cytokines, in the serum of the model animals were significantly higher than those in the control group. The pathological changes and imaging changes are used as evaluation indicators to make a comprehensive and comprehensive evaluation of the rat model of arthritis. The results show that this method greatly enriches the way of RA rat model preparation.
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R-332;R593.22

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