【摘要】： 目的: 比較聯(lián)合激動Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)的樹突細(xì)胞(dendritic cell.DC)和常規(guī)培養(yǎng)的樹突細(xì)胞在功能上的區(qū)別,并通過體外試驗比較兩者作為腫瘤疫苗對表達(dá)CEA腸癌的治療作用。 材料與方法: 本課題使用人CEA轉(zhuǎn)基因小鼠和轉(zhuǎn)染人CEA的MC38小鼠腸癌細(xì)胞株MC38-CEA作為動物模型。將體外培養(yǎng)的DC分為聯(lián)合激動TLR組和常規(guī)組,通過檢測DC表面重要標(biāo)志物、DC分泌IL-12量及DC對淋巴細(xì)胞的促增殖作用,比較兩者在激活細(xì)胞免疫方面功能的區(qū)別。另外,在DC上荷載小鼠MHCⅠ類分子限制性表位CEA_(526-533),制備CEA特異性DC腫瘤疫苗,在體外進(jìn)行細(xì)胞毒試驗,初步研究其對MC38-CEA的治療作用。 結(jié)果: 1聯(lián)合TLR組DC重要表面標(biāo)志物的表達(dá)普遍高于常規(guī)組DC。 2聯(lián)合TLR組DC的IL-12分泌量顯著高于常規(guī)組DC。(P＜0.001) 3聯(lián)合TLR組DC對淋巴細(xì)胞的促增值作用顯著強(qiáng)于常規(guī)組DC(P＜0.05)。 4聯(lián)合TLR組DC作為DC疫苗免疫小鼠后獲得的效應(yīng)細(xì)胞對MC38-CEA腸癌細(xì)胞在較高效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞(E:T)比值時具有一定的殺傷作用并顯著優(yōu)于常規(guī)組(P＜0.05)。對荷載CEA_(526-533)的MC38-CEA腸癌細(xì)胞,聯(lián)合TLR組和常規(guī)組都具有高效的特異性殺傷作用,其中在較低E:T值時聯(lián)合TLR組的殺傷作用顯著高于常規(guī)組(P＜0.05)。 結(jié)論: 1聯(lián)合TLR組DC與常規(guī)組DC相比,具有更理想的成熟度,并能更有效激活細(xì)胞免疫反應(yīng),提示聯(lián)合激動TLR可能增強(qiáng)DC腫瘤疫苗的抗腫瘤效應(yīng)。 2使用聯(lián)合激動TLR的DC制備CEA特異性DC腫瘤疫苗,在體外試驗中對MC38-CEA小鼠腸癌細(xì)胞株具有一定殺傷作用且是CEA特異性的,而常規(guī)DC疫苗無明顯殺傷作用,但還須進(jìn)行體內(nèi)試驗進(jìn)一步驗證治療效果。
[Abstract]:Aim: to compare the functional differences between dendritic cells (dendritic cell.DC) combined with Toll-like receptor (dendritic cell.DC) and dendritic cells (DC) cultured in vitro, and to compare their therapeutic effects on the expression of CEA in colorectal cancer as tumor vaccine in vitro. Materials and methods: human CEA transgenic mice and MC38 mouse intestinal cancer cell line MC38-CEA transfected with human CEA were used as animal models. The DC cultured in vitro was divided into two groups: the combined TLR group and the routine group. By detecting the amount of IL-12 secreted by DC and the effect of DC on the proliferation of lymphocytes, the difference of the function of DC in activating cellular immunity was compared. In addition, CEA specific DC tumor vaccine was prepared by loading mouse MHC class I restricted epitope CEA _ (526-533) on DC. The cytotoxicity test was carried out in vitro to study the therapeutic effect of CEA _ (526-533) on MC38-CEA. Results: 1 the expression of important surface markers of DC in combined TLR group was generally higher than that in DC2 combined with TLR group, and the IL-12 secretion in DC was significantly higher than that in conventional group DC. (P < 0.001) 3 combined with TLR. The effect of DC group on lymphocyte proliferation was significantly stronger than that of normal group (DC (P < 0. 05). (4) combined with TLR group DC was used to immunize mice with MC38-CEA intestinal cancer cells in higher effector cells: target cells (E: t) The ratio had a certain killing effect and was significantly better than the routine group (P < 0.05). MC38-CEA intestinal cancer cells loaded with CEA526-533 had highly specific killing effects in both the combined TLR group and the conventional group. The killing effect of the combined TLR group was significantly higher than that of the conventional group at a lower E: t value (P < 0. 05). Conclusion: (1) compared with conventional TLR group, DC in combination with TLR has more ideal maturity and more effective activation of cellular immune response. It is suggested that the combined stimulation of TLR may enhance the antitumor effect of DC tumor vaccine. 2 the DC combined with agitated TLR can be used to prepare CEA specific DC tumor vaccine. In vitro test, the MC38-CEA mouse intestinal cancer cell line has a certain killing effect and is CEA specific, but the conventional DC vaccine has no obvious killing effect, but the in vivo test must be carried out to further verify the therapeutic effect.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 金貽婷;鄒強(qiáng);張延齡;;以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的乳腺癌免疫治療[J];國際外科學(xué)雜志;2006年03期

2 戚美芬;朱玉蘭;;皮內(nèi)注射不同進(jìn)針方式對DC疫苗誘導(dǎo)乳腺癌患者免疫應(yīng)答的影響[J];護(hù)理學(xué)雜志;2009年10期

3 孫萬軍;徐東剛;艾輝勝;;MHC-肽四聚體技術(shù)研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2006年05期

4 王昊亮;付曉嵐;姜曼;黎萬玲;唐艷;吳玉章;;CT抗原KM-HN-1 HLA-A*0201限制性表位預(yù)測及其與HLA-A*0201結(jié)合強(qiáng)度分析[J];免疫學(xué)雜志;2006年06期

5 孫婷;魏立梅;丁剛;;利用經(jīng)修飾的survivin短肽體外誘導(dǎo)對胃癌細(xì)胞系具有限制性殺傷作用的特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2012年35期

6 李慧忠;暢繼武;;可溶性MHC-肽四聚體技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2007年01期

7 王曉花,孫成剛;抗原特異性CTL檢測新技術(shù)——可溶性MHC-肽四聚復(fù)合物法的功能和應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2004年06期

8 傅青嶺;劉厚奇;;端粒酶與癌癥靶向治療[J];生命科學(xué);2010年12期

9 方麗;胡巍;;全腫瘤細(xì)胞抗原研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報;2013年08期

10 曹磊;任華;;肺癌的免疫學(xué)治療[J];協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志;2011年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫玉靜;腫瘤基因工程納米疫苗的研制及抗腫瘤效應(yīng)的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 葛偉;腫瘤基因工程納米乳劑疫苗的藥效學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 應(yīng)學(xué)翔;DCIK細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用與aPKC抑制劑對其影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

4 胡沛臻;惡性腫瘤基因工程納米疫苗的研制及其藥代動力學(xué)初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

5 楊闊;慢病毒介導(dǎo)對TGF-β失敏感的腫瘤特異性CTL在前列腺癌免疫治療中的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

6 馬云龍;胸腺肽α1作用于樹突狀細(xì)胞的抗腫瘤免疫機(jī)制的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

7 張存;B7-H1疫苗增強(qiáng)HER-2疫苗抗腫瘤免疫效應(yīng)的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 劉洋;XAGE基因的表達(dá)及其在腫瘤生長與轉(zhuǎn)移中的功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

9 葉建新;減毒沙門氏菌為載體的4-1BBL基因疫苗對實驗性大腸癌生長的影響[D];蘇州大學(xué);2009年

10 趙海濤;肝細(xì)胞肝癌的新非編碼基因及病毒相關(guān)性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 嚴(yán)學(xué)倩;CD47分子胞外段蛋白的表達(dá)及其對Jurkat細(xì)胞的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 吳林;HPV-E6E7基因轉(zhuǎn)染人樹突狀細(xì)胞抗食管癌體內(nèi)外研究[D];汕頭大學(xué);2007年

3 郭秋莉;抑制性免疫微環(huán)境中CD4～+CD69～+T細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其功能的初步鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 唐亮;抑制性消減雜交技術(shù)克隆腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

5 錢亞云;可溶性HLA-A~*0201/CAP-1四聚體的構(gòu)建及其在結(jié)直腸癌研究中的初步應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

6 胡健衛(wèi);CD40L刺激的樹突細(xì)胞增強(qiáng)CEA轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞免疫的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

7 王昊亮;CT抗原KM-HN-1 HLA-A~*0201限制性CTLs表位的鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 熊銳華;MHC-肽四聚體技術(shù)在CTL表位鑒定中的應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 曹曉靜;APE1血清學(xué)檢測方法的建立及其在肺癌診斷中的應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 陳秋艷;重組乙酰膽堿受體α亞單位-BirA識別多肽序列基因的構(gòu)建與表達(dá)[D];延邊大學(xué);2009年

，

本文編號：2144065