發(fā)布時間：2018-07-16 07:44

【摘要】： 腸出血性大腸桿菌EHEC O157:H7(Entero-hemorrhagic E.Coli,EHEC O157:H7)引起的感染性腹瀉是近年來危害極其嚴重的腸道傳染病。它除引起感染性腹瀉、出血性腸炎(HC)外,還可引發(fā)溶血性尿毒綜合征(HUS)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)等并發(fā)癥。自該菌被分離鑒定以來,已在國內(nèi)外引起多次爆發(fā)與流行。直至2006和2007年,美國和日本仍有該菌引起人HUS甚至死亡的報道。大腸桿菌O157也大面積存在于我國,且呈多因素感染之勢。我國已將EHEC列為21世紀可能對國人衛(wèi)生健康有重大影響的12種病原微生物之一。因此進一步加強EHEC O157:H7的診、防、治研究已迫在眉睫。由于O157的爆發(fā)流行以及在治療上的無奈,疫苗研究就顯得尤其緊迫。外膜蛋白(Omp)是大腸桿菌的一個重要毒力因子,其涉及大腸桿菌病的致病機理及免疫機理,這預(yù)示著Omp對大腸桿菌病的防治有廣闊的應(yīng)用前景。本試驗對重慶地區(qū)家畜大腸桿菌O157的致病性、遺傳相關(guān)性、Omp進行初步研究,旨在為該菌診、防、治研究提供重要的科學依據(jù)。 1.大腸桿菌O157的致病性分析 目的了解和比較重慶市家畜大腸桿菌O157分離株間的致病性。方法從重慶市6個地區(qū)的養(yǎng)殖場分離到的11株大腸桿菌O157對小白鼠進行感染試驗,取小鼠肝、脾、腎、腸等病變組織制備病理切片,光鏡觀察切片。結(jié)果11株O157分離株均能感染致死小鼠,引起小鼠腸壁變薄充血,腸粘膜壞死脫落,肝腎淤血變性壞死,脾出血,肺淤血等組織病變。結(jié)論重慶市大腸桿菌O157分離株均具有損害小鼠各臟器并感染致死的能力,且各菌株引起小鼠病變較為一致,病變程度有一定的差異。 2.大腸桿菌O157毒力基因stx2/stx2c的檢測 目的了解O157分離株是否攜帶stx2及stx2c亞基因。方法用PCR技術(shù)擴增stx2/stx2c基因B亞基的保守序列,克隆至pMD18-T載體進行測序和序列比較分析。結(jié)果除了分離自榮昌/永川的RY8菌株,其他菌株未擴增出stx2/stx2c B亞基。該序列與stx2,stx2c,stx2d,stx2e,stx2fB亞基同源性分別為99.3%、94.8%、86.3%、84.5%、80%。結(jié)論首次檢測出重慶市有攜帶高致病性stx2基因的O157菌株存在,故應(yīng)加強本地大腸桿菌O157檢測工作,防患于未然。 3.大腸桿菌O157外膜蛋白的SDS-PAGE分析 目的了解O157分離株遺傳相關(guān)性及主要Omp的免疫原性。方法采用超聲波破碎、N-十二烷基肌氨酸處理和超速離心技術(shù)提取主要Omp,用Omp分型法對分離株Omp進行分型;提取的Omp免疫家兔自制抗血清,用免疫印記試驗(western blot)分析菌株Omp的免疫原性。結(jié)果SDS-PAGE結(jié)果將分離株分為3個Omp型:YB2菌株為Omp-A型:YB1、YB3、YB4、YB5、YB6、YB8、YB9、YB10、YB11菌株為Omp-B型;YY7菌株為Omp-C型。3種Omp型代表株主要Omp均能產(chǎn)生與之結(jié)合的抗體,且Sakai標準株與分離株間存在共同抗原片段。結(jié)論重慶市家畜大腸桿菌O157菌株遺傳性較為單一,但也出現(xiàn)極小程度的遺傳分化。菌株主要Omp具免疫原性,且Sakai標準株與分離株存在共同的具有免疫原性的蛋白質(zhì)片段。
[Abstract]:EHEC 157 : H7 ( Entero - hemorrhagic E . Coli , EHEC 157 : H7 ) caused by enterohemorrhagic Escherichia coli is an extremely serious intestinal infectious disease in recent years .


1 . Pathogenic analysis of Escherichia coli 0157


Objective To understand and compare the pathogenicity of 11 strains of E . coli 0157 isolated from livestock farms in 6 districts of Chongqing .


2 . Detection of the virulence gene stx2 / stx2c of Escherichia coli 0157


The stx2 / stx2c B subunit was amplified by PCR . The homology of stx2 , stx2c , stx2d , stx2e and stx2Bsubunits was 99 . 3 % , 94 . 8 % , 86 . 3 % , 84 . 5 % and 80 % respectively .


3 . SDS - PAGE analysis of outer membrane protein of Escherichia coli 0157


Objective To study the genetic correlation of Omp and the immunogenicity of Omp in isolated strains . The results showed that the isolates were Omp - A : YB1 , YB3 , YB4 , YB5 , YB6 , YB8 , YB4, YB5 , YB6 , YB8 , YB8 , YB, YB11 were Omp - C type .
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R378.11

【引證文獻】

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1 宋舟;陳偉;張立艷;董海兵;白換力;付本懂;申海清;韋旭斌;;大腸桿菌外膜蛋白A研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年05期

2 楊萌萌;何生虎;郭磊;;一起奶牛大腸桿菌病的診斷[J];動物醫(yī)學進展;2012年10期

3 邢麗萍;楊月清;李萍;周哠;胡瑞林;解希帝;;呼和浩特市食品中大腸埃希氏菌O157:H7污染狀況調(diào)查[J];疾病監(jiān)測與控制;2013年01期

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本文編號：2125716