【摘要】：目的 :分離、鑒定和培養(yǎng)人精原干細(xì)胞(SSC),以獲得純化、富集的人SSC并為其研究與應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:通過(guò)免疫熒光方法檢測(cè)睪丸組織中CD90表達(dá)情況;應(yīng)用兩步酶消化和差速貼壁法分離人睪丸生精細(xì)胞,以CD90為人SSC標(biāo)志,用免疫磁珠分選技術(shù)(MACS)對(duì)人睪丸生精細(xì)胞進(jìn)行分選,并利用RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)分選所得CD90+細(xì)胞進(jìn)行鑒定;同時(shí)用SG培養(yǎng)液將CD90+細(xì)胞與支持細(xì)胞進(jìn)行體外共培養(yǎng)。結(jié)果:MACS分選所得CD90+細(xì)胞大小、形態(tài)特征較為均一,RT-PCR檢測(cè)其表達(dá)人SSC標(biāo)記性基因,免疫熒光檢測(cè)其高表達(dá)人SSC特異標(biāo)記GFRA-1、GPR125和UCHL-1,陽(yáng)性率達(dá)90.5%,其在SG培養(yǎng)液中與支持細(xì)胞共培養(yǎng)14 d后仍可保持良好活性。結(jié)論:CD90可作為人SSC特異性標(biāo)志之一,結(jié)合差速貼壁和MACS可高效分選人SSC,分選所得SSC可在SG培養(yǎng)液中進(jìn)行體外培養(yǎng)。
[Abstract]:Objective: to isolate, identify and culture human spermatogonial stem cells (SSC) in order to obtain purified and enriched human SSC and lay a foundation for its research and application. Methods: the expression of CD90 in testicular tissue was detected by immunofluorescence method, and human testicular spermatogenic cells were isolated by two-step enzyme digestion and differential adherence method. CD90 was used as a SSC marker. Human testicular spermatogenic cells were separated by immunomagnetic bead sorting (Macs). CD90 cells were identified by RT-PCR and immunocytochemistry, and CD90 cells and Sertoli cells were co-cultured in SG medium in vitro. Results the size and morphological characteristics of CD90 cells were homogenous. RT-PCR was used to detect the expression of human SSC marker gene. The positive rate of GPR125 and UCHL-1 was 90.5, and the positive rate of GPR125 and UCHL-1 was 90.5. The positive rate of GPR125 and UCHL-1 was 90.5%. The positive rate of GPR125 and UCHL-1 was 90.5%. The positive rate of GPR125 and UCHL-1 was 90.5%. Conclusion: the specific marker of human SSC can be used as one of the specific markers of human SSC. Human SSC can be efficiently separated by differential adhesion and Macs. The isolated SSC can be cultured in the medium of SG in vitro.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院泌尿外科;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院臨床干細(xì)胞中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31230048) 國(guó)家973重大科學(xué)研究計(jì)劃(2013CB947901)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R321.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2123496