發(fā)布時間：2018-07-11 11:08

  本文選題：粒細胞集落刺激因子 + CD4+CD25+調節(jié)性T細胞��； 參考：《第四軍醫(yī)大學》2008年碩士論文

【摘要】： 自Barnard于1967年首次成功完成人類心臟移植手術以來,經(jīng)過近半個世紀的發(fā)展,目前同種異體心臟移植被公認為是治療各種終末期心臟病的最有效方法,并廣泛地應用于臨床。然而移植排斥反應始終是困擾臨床醫(yī)生的一個主要問題。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是最重要的造血生長因子之一,最新的研究成果表明其對獲得性免疫和T細胞耐受有十分重要的作用,但機制尚未闡明。本研究擬應用改良的同種異體大鼠腹腔異位心臟移植模型,探討G-CSF對心臟移植免疫的調節(jié)作用及其可能機制。 目的:改良原有大鼠腹腔異位心臟移植模型的外科技巧,建立成功率高且更加易于實施的心臟移植模型。利用此改良模型研究G-CSF對心臟移植排斥反應的作用,探討其可能機理,為臨床有效調控、治療心臟移植排斥反應及其他免疫性疾病提供理論依據(jù)。 方法:1.對傳統(tǒng)Ono術式的受體準備、供心切取和吻合方法等環(huán)節(jié)進行改進,采用此改良方法建立大鼠腹部異位心臟移植模型。2. Lewis(RT~1)與BN(RT~n)大鼠各40只隨機分為4組(每組10只,Lewis大鼠為受體,BN大鼠為供體),于移植術后當天起分別給予各組受體鼠重組人粒細胞集落刺激因子(rh-G-CSF)0μg/kg/day(對照組)、125μg/kg/day、250μg/kg/day、500μg/kg/day,共6天。術后第6天行供心組織學檢查、混合淋巴反應實驗(MLR),并觀察各組供心存活時間。探討不同劑量的rh-G-CSF對大鼠心臟移植排斥反應的抑制作用。3.對于第二步實驗篩選出的250μg/kg/day組進一步行細胞因子檢測、外周血流式細胞儀檢測以及過繼轉移實驗,其各項指標與各對照組(包括普通大鼠、只移植心臟不使用G-CSF大鼠、只使用G-CSF不移植心臟大鼠)比較,探討rh-G-CSF對心臟移植排斥反應抑制作用的機理。 結果:1.共實施100例大鼠腹部異位心臟移植術,89例成功。供心缺血時間32±5 min,整個手術耗時60±10 min。2. 250μg組與500μg組在體內、外均顯示排斥反應較對照組顯著減弱,125μg組中以上各指標與對照組比較無顯著差異。3.在心臟移植受體鼠和普通大鼠的骨髓中CD4+CD25+T細胞比例顯著高于外周血。在不使用rh-G-CSF的情況下,心臟移植手術前、后大鼠外周血CD4+CD25+T細胞比例無顯著變化。給予普通大鼠rh-G-CSF 250μg/kg/day共6天后以及術后給予心臟移植受體鼠rh-G-CSF 250μg/kg/day共6天后,其骨髓細胞中CD4+CD25+T細胞數(shù)量都有顯著地下降,并伴隨外周血CD4+CD25+T細胞比例顯著增加。Rh-G-CSF處理心臟移植受體鼠后,使其MLR體系中白細胞介素10(IL-10)、轉化生長因子?1(TGF-?1)顯著增加,其包含有CD4+CD25+T細胞的脾細胞可以將抗排斥反應作用過繼轉移給第二級受體鼠,并且在過繼轉移實驗和MLR中均顯示出較強的免疫抑制能力。 結論:1.經(jīng)典的Ono術式經(jīng)改進后,術中縮短了供心缺血時間,降低了吻合難度,手術成功率高。整個過程均可單人操作,無需顯微鏡,使其易于掌握與開展。2. G-CSF可以在體內、外誘導T細胞的低反應性,其抗心臟移植排斥反應的作用與劑量有關。3.同種異體抗原刺激和手術創(chuàng)傷并不能誘導CD4+CD25+調節(jié)性T細胞的增殖。G-CSF增加外周血的CD4+CD25+T細胞是其發(fā)揮抗排斥作用的重要機制。G-CSF將骨髓中的CD4+CD25+T細胞動員至外周血是本實驗外周血中CD4+CD25+T細胞增加的主要機理。并且同種異體抗原的刺激提升了CD4+CD25+T細胞在體內、外抑制潛能。其中IL-10和TGF-β1是發(fā)揮免疫抑制作用的重要效應細胞因子。
[Abstract]:Since the first successful completion of human heart transplantation by Barnard in 1967, after nearly half a century of development, allograft heart transplantation is now recognized as the most effective method for the treatment of various end-stage heart diseases and is widely used in clinical practice. However, graft rejection is a major problem that puzzles clinicians. Cell colony stimulating factor (G-CSF) is one of the most important hematopoietic growth factors. The latest research results show that it has a very important role in acquired immunity and T cell tolerance, but the mechanism has not been elucidated. This study is intended to apply a modified heterotopic heart transplant model of allogeneic rat intraperitoneal and to explore the regulation of G-CSF on heart transplantation immunity. The role and its possible mechanism.
Objective: to improve the surgical skills of the original rat model of heterotopic heart transplantation, to establish a heart transplant model with high success rate and more easy to implement. This modified model is used to study the effect of G-CSF on rejection of heart transplantation and to explore its possible mechanism for clinical effective regulation and treatment of heart transplant rejection and other immune diseases. Provide a theoretical basis.
Methods: 1. to prepare for the traditional Ono procedure, for the improvement of the heart cutting and anastomosis, the improved method was used to establish the rat abdominal heterotopic heart transplantation model,.2. Lewis (RT~1) and BN (RT~n) rats, each of which were randomly divided into 4 groups (10 rats in each group, Lewis rats as receptors, BN rats as donor), and respectively to the day after transplantation. The recombinant human granulocyte colony stimulating factor (rh-G-CSF) 0 mu g/kg/day (control group), 125 g/kg/day, 250 g/kg/day, 500 mu g/kg/day were given for 6 days. The donor heart tissue examination, mixed lymphoid reaction test (MLR) were performed on the sixth days after operation, and the survival time of each group was observed. The rejection reaction of different doses of rh-G-CSF on rat heart transplantation was discussed. The inhibitory effects of.3. on further cell factor detection, peripheral blood flow cytometry and adoptive transfer test, selected by the second step experiment, were compared with the control group (including the common rats, only the heart transplant without G-CSF rats, only the G-CSF non transplant rat), and the study of rh-G-CSF. The mechanism of inhibition of rejection in heart transplantation.
Results: 1. 100 cases of abdominal heterotopic heart transplantation in rats were performed, 89 cases were successful. The ischemic time of donor heart was 32 + 5 min, the whole operation took 60 + 10 min.2. 250 mu g group and 500 g group in the body, and the rejection reaction was significantly lower than that of the control group. There was no significant difference between the indexes of the 125 mu g group and the contrast group.3. in the heart transplant recipient mice. The proportion of CD4+CD25+T cells in the bone marrow of the normal rats was significantly higher than that in the peripheral blood. Without the use of rh-G-CSF, there was no significant change in the proportion of CD4+CD25+T cells in the peripheral blood of the rats before the heart transplant operation. The total rh-G-CSF 250 mu g/kg/day was given to the normal rats for 6 days and the rh-G-CSF 250 mu g/kg/day was given to the heart transplant recipient rats after the operation. After the day, the number of CD4+CD25+T cells in the bone marrow cells decreased significantly, and the proportion of CD4+CD25+T cells in the peripheral blood increased significantly with the.Rh-G-CSF treatment of the heart transplant recipient rats, making the MLR system interleukin 10 (IL-10), transforming growth factor 1 (TGF-? 1) increased significantly, and the spleen cells containing CD4+CD25+T cells could be resistant to the spleen cells containing CD4+CD25+T cells. The adoptive transfer of the rejection reaction was transferred to the second level receptor mice, and both showed strong immunosuppression in adoptive transfer experiments and MLR.
Conclusion: 1. the classical Ono method has been improved, the ischemia time of donor heart is shortened, the difficulty of the anastomosis is reduced, the success rate of the operation is high. The whole process can be operated in a single person without a microscope, so that it can easily master and develop the low reverse stress of the T cells in the body, and the effect of the.2. G-CSF on the rejection of the heart transplantation and the dose. .3. allogenic antigen stimulation and surgical trauma can not induce the proliferation of CD4+CD25+ regulatory T cells and.G-CSF increase the CD4+CD25+T cells in peripheral blood, which plays an important role in anti rejection..G-CSF to mobilize CD4+CD25+T cells from the bone marrow to peripheral blood is the main mechanism of the increase of CD4+CD25+T cells in the peripheral blood of this experiment. The stimulation of allogenic antigen enhances the inhibitory potential of CD4+CD25+T cells in vivo and in vitro. Among them, IL-10 and TGF- beta 1 are important cytokines that play the role of immunosuppression.
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392;R654.2

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