本文選題：抗壞血酸 + 金葡液　； 參考：《浙江大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 研究背景 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一種多潛能成體干細(xì)胞,主要存在于骨髓。體外分離培養(yǎng)后,在一定的誘導(dǎo)條件下,MSCs具有向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和心肌細(xì)胞等多向分化的能力,且分化后各種組織細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖能力。這種多向分化能力使其成為組織工程、基因治療等的理想靶細(xì)胞。 骨折是臨床上常見的疾病,在治療過程中,在骨折斷端或新創(chuàng)面處注射金葡素注射液有利于骨折的愈合,這其中發(fā)揮作用的是金葡素注射液的主要成分——腸毒素C。朱建民等報(bào)道金葡液雖然對成骨細(xì)胞的增殖和分化功能無明顯作用,但具有明顯的促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化作用。 在動物實(shí)驗(yàn)和臨床研究均證明了金葡液有加速骨折端血腫吸收、機(jī)化和促進(jìn)骨痂形成、加速骨折愈合的作用;而抗壞血酸可以增強(qiáng)堿性磷酸酶(AKP)的活性、提高成骨細(xì)胞的活性。 但是金葡液對MSCs是否有作用、是否可以通過金葡液聯(lián)合抗壞血酸,促進(jìn)MSCs向成骨細(xì)胞分化,達(dá)到促進(jìn)成骨細(xì)胞生成、加速骨折愈合的作用,目前尚無研究報(bào)道。 研究目的 本實(shí)驗(yàn)旨在研究金葡液聯(lián)合抗壞血酸對MSCs分化的作用、對成骨細(xì)胞的生成及礦化功能的影響等,為臨床上金葡液聯(lián)合抗壞血酸治療骨折提供理論依據(jù)。 研究方法 將培養(yǎng)第二代的MSCs分組誘導(dǎo):金葡素注射液誘導(dǎo)組(濃度分別為10ng/L、30 ng/L、100 ng/L);金葡素注射液(濃度分別為10 ng/L、30 ng/L、100ng/L)+抗壞血酸(50μg/ml)誘導(dǎo)組。同時(shí)以正常培養(yǎng)液培養(yǎng)的MSCs為對照組。通過堿性磷酸酶活性檢測、茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)顯示、掃描電鏡、透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等方法,探討其向成骨細(xì)胞分化能力。 研究結(jié)果 經(jīng)金葡液誘導(dǎo)后,各組堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性隨金葡液濃度增高,酶活性測定值增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;經(jīng)金葡液聯(lián)合抗壞血酸誘導(dǎo)后,各組AKP酶活性均顯著增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 各組誘導(dǎo)28 d后,0.1%茜素紅-Tris-HCl染色,倒置顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)較多的紅色結(jié)節(jié),大小不等,散在或成簇分布。與金葡液組相比,金葡液聯(lián)合抗壞血酸組鈣結(jié)節(jié)形成數(shù)明顯增高,結(jié)節(jié)直徑變大。 掃描電鏡結(jié)果顯示,與單純金葡液誘導(dǎo)組相比,該組細(xì)胞胞質(zhì)突起粗大扁平,細(xì)胞表面微絨毛豐富,數(shù)量明顯增多。 透射電鏡結(jié)果顯示:MSCs細(xì)胞經(jīng)各誘導(dǎo)組處理后粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、線粒體增多,金葡液聯(lián)合抗壞血酸組細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體較單用金葡液誘導(dǎo)組更為豐富,線粒體增多且基質(zhì)密度高。 研究結(jié)論 各組誘導(dǎo)28天后,通過金葡液聯(lián)合抗壞血酸組誘導(dǎo)的MSCs堿性磷酸酶活性高于金葡組,茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)增加,并通過電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),表明其向成骨細(xì)胞分化增強(qiáng),成骨細(xì)胞蛋白合成能力增強(qiáng)。因此,金葡液聯(lián)合抗壞血酸對MSCs向成骨細(xì)胞分化有促進(jìn)作用。
[Abstract]:Background Bone Marrow Mesenchymal Stem cells (mesenchymal stem cells) are multipotent adult stem cells which mainly exist in bone marrow. After isolation and culture in vitro, MSCs have the ability to differentiate into osteoblasts, chondrocytes, nerve cells, adipocytes and cardiomyocytes under certain induction conditions. This multidirectional differentiation makes it an ideal target cell for tissue engineering, gene therapy, etc. Fracture is a common disease in clinic. In the course of treatment, injection of staphylococcus aureus injection at the broken end of fracture or new wound is beneficial to the healing of fracture, and the main component of staphylococcus aureus injection is enterotoxin C. Zhu Jianmin et al reported that staphylococcus aureus had no obvious effect on the proliferation and differentiation of osteoblasts, but it had obvious effect on promoting the mineralization of osteoblasts. Both animal experiments and clinical studies have proved that staphylococcus aureus fluid can accelerate the absorption of hematoma at the fracture end, organize and promote callus formation and accelerate fracture healing, while ascorbic acid can enhance the activity of alkaline phosphatase (AKP) and osteoblast. However, whether the staphylococcus aureus liquid can promote the differentiation of MSCs into osteoblasts and accelerate the fracture healing through the combination of staphylococcus aureus and ascorbic acid has not been reported. Objective to study the effects of staphylococcus aureus combined with ascorbic acid on the differentiation of MSCs and on the formation and mineralization of osteoblasts in order to provide a theoretical basis for the treatment of fracture with staphylococcus aureus combined with ascorbic acid. Methods the cultured MSCs were divided into two groups: staphylococcus aureus injection group (10 ng / L) and staphylococcin injection (10 ng / L ~ (30) ng / L ~ (-1) ascorbic acid (50 渭 g/ml) group. MSCs cultured in normal medium were used as control group. Alkaline phosphatase activity, alizarin red stained calcium nodules, scanning electron microscope and transmission electron microscope were used to observe the ultrastructure of osteoblasts and the ability of differentiation into osteoblasts was studied. Results after induced by staphylococcus aureus, the activity of alkaline phosphatase in each group increased with the concentration of staphylococcus aureus, but there was no significant difference between the two groups, and the activity of alkaline phosphatase was induced by staphylococcus aureus combined with ascorbic acid. The activity of AKP in each group was significantly higher than that in control group. After 28 days of induction, 0.1% alizarin red -Tris-HCl staining was observed and observed under inverted microscope. Compared with the staphylococcus aureus group, the number of calcium nodules and the diameter of the nodules in the staphylococcus aureus combined with ascorbic acid group were significantly increased. The results of scanning electron microscope showed that the cytoplasmic processes of the cells were thicker and flattened, and the number of microvilli on the surface of the cells was more than that of the group induced by staphylococcus aureus. The results of transmission electron microscope showed that the rough endoplasmic reticulum, ribosome and mitochondria were increased after treated with different induction groups, and the rough endoplasmic reticulum and ribosome were more abundant in staphylococcus aureus combined with ascorbic acid group. Mitochondria increased and matrix density was high. Conclusion after 28 days of induction, the alkaline phosphatase activity of MSCs induced by staphylococcus aureus combined with ascorbic acid group was higher than that of staphylococcus aureus group, the calcium nodules stained with alizarin red increased, and the ultrastructure of MSCs was observed by electron microscope. The results showed that the differentiation into osteoblasts was enhanced, and the protein synthesis ability of osteoblasts was enhanced. Therefore, staphylococcus aureus combined with ascorbic acid can promote the differentiation of MSCs into osteoblasts.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329

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本文編號：2103290