PMA體外誘導(dǎo)小鼠多能干細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化
本文選題:多能干細(xì)胞 + 心肌細(xì)胞 ; 參考:《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》2015年04期
【摘要】:目的研究丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)對(duì)小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞體外分化為心肌細(xì)胞的影響,以建立一種高效安全的體外誘導(dǎo)i PSC分化為心肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。方法用懸滴法形成擬胚體(EBs),PMA誘導(dǎo)其向心肌細(xì)胞定向分化。免疫細(xì)胞學(xué)標(biāo)記檢測(cè)心肌肌鈣蛋白T(c Tn T)和α橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白(α-actinin)的表達(dá);RT-PCR和q-PCR檢測(cè)Brachyury,c Tn T,MLC2a,NKX2.5和GATA4等mRNA的表達(dá)。以添加相應(yīng)DMSO作為對(duì)照組,觀察各組出現(xiàn)搏動(dòng)擬胚體的數(shù)量,計(jì)算分化比率。結(jié)果 PMA誘導(dǎo)小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的最佳濃度為100 nmol/L,此時(shí)擬胚體搏動(dòng)率可達(dá)53%,顯著高于對(duì)照組(12%),且PMA誘導(dǎo)產(chǎn)生的心肌細(xì)胞表達(dá)多種心肌蛋白及基因,具有心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征。結(jié)論 PMA能夠促進(jìn)mi PSC在體外定向分化為心肌樣細(xì)胞。
[Abstract]:Objective to study the effect of propanediol methyl ether acetate (PMA) on the differentiation of mouse pluripotent stem cells into cardiomyocytes in vitro, and to establish an efficient and safe method for inducing iPSC to differentiate into cardiomyocytes in vitro. Methods the embryoid body (EBs) PMA was induced to differentiate into cardiomyocytes by suspension drop method. The expressions of cardiac troponin T (c TnT) and 偽 -striated actin (偽 -actinin) were detected by immunocytochemistry. The mRNA expressions of BrachyuryytnTnTnTnTnTnTnTnTMLC2aNKX2.5 and GATA4 were detected by RT-PCR and q-PCR respectively. The number of pulsatile embryoid bodies in each group was observed and the differentiation ratio was calculated by adding corresponding DMSO as control group. Results the optimal concentration of PMA induced pluripotent stem cells to differentiate into cardiomyocytes was 100 nmol / L, and the pulsatile rate of embryoid body was 53, which was significantly higher than that of control group (12%), and the cardiomyocytes induced by PMA expressed many kinds of myocardial proteins and genes. It has the structural characteristics of cardiomyocytes. Conclusion PMA can promote the differentiation of mi PSC into cardiomyocytes in vitro.
【作者單位】: 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(31271039;31400832)
【分類號(hào)】:R329.2
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,本文編號(hào):2097938
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