本文選題：豬輪狀病毒 + 滅活疫苗��； 參考：《東北農業(yè)大學》2009年碩士論文

【摘要】： 豬輪狀病毒(Porcine Rotavirus, PRV)屬呼腸病毒科輪狀病毒屬成員,是引起仔豬病毒性腹瀉的重要病原之一,該病在世界范圍內普遍存在,給世界各地的畜牧業(yè)造成嚴重的損失。該病主要感染幼畜,1~10日齡仔豬感染后發(fā)病率可超過80%,死亡率高達50%~100%。主要癥狀為嚴重腹瀉,部分病例因嚴重脫水、酸堿平衡失調并且繼發(fā)感染而死亡。目前還沒有治療輪狀病毒腹瀉的特效藥物。接種疫苗來預防輪狀病毒感染顯得尤為重要。因此,世界衛(wèi)生組織多次呼吁各國科學家研制開發(fā)有效的輪狀病毒疫苗,并將其列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項目之一。 本實驗制備了豬輪狀病毒油乳劑甲醛和BEI滅活疫苗,并以家兔為模型動物,肌肉接種后進行了疫苗免疫原性的測定。 將豬輪狀病毒分離株JL94株在恒河猴腎細胞系(MA-104)細胞系上傳代,通過電鏡技術、RT-PCR、序列測定和間接免疫熒光對豬輪狀病毒毒種進行了鑒定,證明該病毒為典型的豬輪狀病毒。將該病毒在MA-104上傳代增殖,當病毒傳至第58代,滴度達到108.25TCID50/ml,制備出基礎種毒。并對種毒進行了細菌和支原體檢測,檢測結果均為陰性。將其擴大培養(yǎng),制備了生產種毒,作為制備疫苗的抗原液。 將該抗原液分別用甲醛和BEI滅活,制備油佐劑疫苗,然后肌肉免疫接種家兔。將家兔隨機分為3組,每組3只,分別命名為甲醛組、BEI一免組和BEI二免組。該疫苗注射家兔后均未引起動物的發(fā)病與死亡,注射部位未見明顯的病理變化,免疫家兔無任何不良反應,精神、食欲良好,證明了該疫苗安全性良好。 免疫后,每隔一周耳靜脈取血,分離血清,用間接ELISA法和病毒在細胞水平上的中和試驗檢測血清中特異性IgG抗體。通過間接ELISA檢測表明,甲醛組家兔在一免時抗體水平升高不明顯,未檢測出抗體效價,在免后2w進行加強免疫,加強免疫后1w的抗體水平明顯升高,達到峰值為1:9600,接著進入了下降階段,14w至17w,ELISA抗體效價維持在1:1200;而BEI一免組和二免組家兔血清中IgG抗體效價均有明顯的上升,峰值均為1:9600,至免疫后的21w一免組的抗體效價仍能維持在1:1000,二免組為1:4000;中和試驗結果表明,甲醛組首次免疫后中和抗體效價升高緩慢,第3w加強免疫后中和抗體效價有明顯的升高趨勢,峰值為1:969,后逐漸降低,檢測到15w降低到1:255;而BEI一免組和二免組家兔,抗體效價變化規(guī)律基本一致,均在第3w抗體效價明顯升高,一免組和二免組中和抗體效價峰值均為1:1800,于免疫后14w抗體效價開始緩慢下降,免疫后21w一免組的抗體效價降低為1:119,二免組為1:230。 兩種檢測方法均顯示,豬輪狀病毒油乳劑BEI滅活疫苗比豬輪狀病毒油乳劑甲醛滅活疫苗免疫家兔后所產生的體液抗體效價高且持續(xù)時間長,且對家兔進行一次免疫與兩次免疫效果相當,因此可得豬輪狀病毒油佐劑BEI滅活疫苗的免疫效果好,且用其對動物進行一次免疫即可。
[Abstract]:Porcine Rotavirus (PRV), a member of rotavirus genus of the family Reovirus, is one of the most important pathogens causing viral diarrhea in piglets. The incidence of the disease can exceed 80% and the mortality is as high as 50% and 100% after infection in 10 days old piglets. The main symptoms were severe diarrhea, and some died of severe dehydration, acid-base imbalance and secondary infection. There is no specific drug available to treat rotavirus diarrhea. Vaccination against rotavirus infection is particularly important. Therefore, the World Health Organization has repeatedly appealed to scientists in various countries to develop an effective rotavirus vaccine and make it one of the top priority vaccine projects. The inactivated vaccine of porcine rotavirus oil emulsion formaldehyde and BEI was prepared in this experiment. The immunogenicity of the vaccine was determined after intramuscular inoculation in rabbits. Porcine rotavirus strain JL94 was isolated from rhesus monkey kidney cell line (MA-104). The strain of porcine rotavirus strain JL94 was identified by electron microscope technique with RT-PCR, sequencing and indirect immunofluorescence. It was proved that the virus is a typical porcine rotavirus. When the virus was transmitted to the 58th generation, the titer of the virus reached 108.25TCID 50 / ml, and the base virus was prepared. Bacteria and mycoplasma were detected and the results were negative. It was expanded to produce the seed virus, which was used as the antiviral solution for the preparation of vaccine. The antigenic solution was inactivated by formaldehyde and BEI respectively to prepare oil adjuvant vaccine and then immunized rabbits intramuscularly. Rabbits were randomly divided into three groups with 3 rabbits in each group. There were no pathological changes in the injection site, no adverse reactions, good spirit and good appetite after injection of the vaccine, which proved that the vaccine was safe. After immunization, blood was collected from ear vein every other week and serum was isolated. Specific IgG antibody in serum was detected by indirect Elisa and virus neutralization test at the cell level. The results of indirect Elisa showed that the level of antibody in formaldehyde group was not significantly increased at the first immunity, but the antibody titer was not detected. The level of antibody was significantly increased at 2 weeks after immunization and 1 week after immunization. The peak value of Elisa antibody was 1: 9600, and the titer of Elisa antibody was maintained at 1: 1200 from 14w to 17w.The titer of IgG antibody in rabbit serum of BEI group and second immunity group increased obviously. The peak value was 1: 9600, and the titer of neutralizing antibody was maintained at 1: 1000 in the first immunized group and 1: 4000in the second immunity group at 21w after immunization. The neutralizing antibody titer of formaldehyde group increased slowly after the first immunization. The titer of neutralizing antibody increased obviously at the third week after immunization, the peak value was 1: 969, then decreased gradually, and the antibody titer decreased to 1: 255 at 15w, but the changes of antibody titer were basically the same in the BEI group and the second immunity group. The titer of neutralizing antibody in the first and second immunized groups was 1: 1800, and the antibody titer began to decrease slowly at the 14th week after immunization. The titer of the first and second immunized groups decreased to 1: 119and 1: 230respectively at the third week after immunization. Both methods showed that the humoral antibody titers of rabbits immunized with porcine rotavirus oil emulsion BEI inactivated vaccine were higher and lasted longer than that of porcine rotavirus oil emulsion formaldehyde inactivated vaccine. The inactivated vaccine of porcine rotavirus oil adjuvant BEI can be obtained, and it can be used to immunize animals once.
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392.1

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